HEK293-BMPR2(Nluc)

稳转细胞株一般交付的是混合克隆细胞系，需要通过抗性药物去进行维持或者筛选，否则稳转效率会降低，因此建议在收到细胞后可以先进行传代建库

1）细胞培养与传代：收到稳转株以后用含药筛浓度抗生素的完全培养基进行细胞培养与传代，建议使用无血清细胞冻存液（IMC-701）将稳转株冻存20-30管后再进行后续实验，以保证稳转株基因表达稳定。 

2）细胞使用周期：取一管/瓶细胞用于实验，后续实验可以用不含抗生素的完全培养基，培养细胞3-4周后可以舍弃该细胞，更换冻存细胞库中新一管的稳转株。

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心3-5min分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

备注：由 于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考

客户在细胞培养过程中， 有任何技术问题可以拨打技术服务电话：400-080-3389，我们随时给予解答。

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

5.建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

6. 该细胞仅供科研使用。

7. 备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

8.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

1、收货时需镜下拍照（看密度、状态）

2、静置后需镜下拍照（看整体密度）

a.如密度50%以下，建议换液并竖瓶培养

b.如密度50%-80%，建议换液培养，隔天观察密度

c.如密度90%，建议传代

3、换液及传代处理前，培养瓶竖着放置至少半小时（使细胞沉到瓶底）；收集上清，必须将瓶内所有培养基（70ml）全部收集！并用PBS（10ml）润洗瓶底并收集！离心转速为1000rpm，5min。

1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等， 重发；

2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发；

3.收到细胞3天内，发现污染问题， 经核实后，重发；

4.常温发货的细胞静置 2 小时后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发；

5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封，出现污染，经核实后，重发；

6.细胞活性 问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发；

7.视具体情况而定。

1.客户操作造成 细胞污染，不重发；

2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发；

3.非我们推荐细胞 培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态 照片，不重发；

5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发；

6.收到细胞发 现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发；

7.视具体情况而定。