| 一、细胞基本属性 |
| 细胞名称 | hPSC来源心肌细胞iCM-H1 |
| 种属来源 | 人 |
| 细胞来源 | 人胚胎干细胞H1 |
| 产品规格 | 1×10×6cells/T25或1mL冻存管 |
| 培养基 | CM维持培养基（含CM维持基础培养基，货号IMI-CM01M1 ；CM维持培养基补充剂（25×），货号IMI-CM01MA） |
| 生长条件 | 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
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| 生长特性 | 贴壁生长
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| 细胞形态 | 细胞胞体则呈现不规则形状，如多角形，部分细胞有聚集倾向，具有搏动能力
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| 冻存细胞 | 冻存细胞存于-80℃冰箱，2周有效期；长期需液氮储存 |
| 生长视频 | |
| 产品货期 | 现货，1周左右 |
| 运输方式 | T25培养瓶/ 顺丰快递（包邮） |
| 供应限制 | 仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
| 特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主 |
| 二、细胞培养操作 |
| 需要材料 | 1.DPBS, No Calcium, No Magnesium 2.RPMI1640 3.FBS
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| 心肌细胞进行再接种 | a.如果需要将心肌细胞按合适密度接种到新的培养皿/瓶中，可对心肌细胞进行再接种，再接种操作会导致20%左右的细胞死亡，即损失20%的细胞。
b.室温平衡心肌细胞复苏液、DPBS溶液，37℃预热心肌细胞消化液。
c.取出心肌细胞铺板液包被过的培养皿/瓶，吸去心肌细胞铺板液并加入适量心肌细胞复苏液，置于5%CO 2 的37℃恒温细胞培养箱中。
d.吸除心肌细胞培养基，加入DPBS溶液清洗一次。
e.移除DPBS，加入预热的心肌细胞消化液使之完全覆盖皿/瓶底。
f.37℃孵育3-5分钟，显微镜下观察到大部分细胞相互分离，表明达到理想的消化时间。
g.向皿/瓶中加入消化液3-5倍体积的RPMI1640+10%FBS终止消化，用枪扇形吹打培养皿/瓶底，使皿/瓶底贴附的心肌细胞脱落，将细胞转移至15ml 离心管中，再加入适量中和液冲洗皿/瓶底，收集剩余细胞加入15ml离心管中，300g离心5分钟。
I .小心移除上清，用心肌细胞复苏液重悬细胞，轻柔吹打混匀，并接种到包被过的培养皿/瓶中，十字晃动使细胞均匀分布。
II.5%CO 2 的37℃恒温培养箱中培养24-48小时后，更换为心肌细胞培养基继续培养。
III.心肌细胞需要在二氧化碳培养箱中继续培养2-8天恢复搏动；此期间心肌细胞需要每隔48h换一次心肌细胞培养基。
重要提醒：吹打力度要轻柔，避免损伤细胞。亦可用心肌细胞培养基+10%FBS终止消化。 |
| 培养材料准备 | 心肌细胞铺板液包被培养皿/瓶：在4℃冰面上，往培养皿/瓶中添加心肌细胞铺板液至完全覆盖皿/瓶底(建议1ml/六孔板单孔)，37℃包被1小时。如果暂时不用，可用塑封膜封口后2-8℃储存，并于1周内使用，保存期间心肌细胞铺板液需始终保持完全覆盖皿底。
重要提醒：操作时需要将铺板液始终置于冰上；正确操作下铺板液应呈清亮，若操作时间过长或温度过高，铺板液会变得粘稠甚至呈胶状，不宜使用。 |
| 心肌细胞复苏(适用于冻存的细胞） | a.将心肌细胞复苏液从4°C冰箱中取出，室温平衡30分钟。
b.打开水浴锅，设定温度为37°C。
c.开启生物安全柜进行紫外灭菌30分种。
d.在冰上将1ml心肌细胞铺板液加入6孔板的一个孔中(0.1ml/cm 2 )，随即前后左右晃动6孔板，使铺板液均匀覆盖孔的表面。
e.将剩余铺板液迅速放回冰箱，将6孔板放入细胞培养箱中孵育1小时。
f.取出孵育好的6孔板，放于生物安全柜中，吸除心肌细胞铺板液后，立刻在孔内加入1ml 心肌细胞复苏液。
g.从高效液氮储存罐中取出需要复苏的细胞，将其放于干冰中暂存。
h.从干冰中取出细胞，迅速将冻存管的下1/2没入水浴锅中，轻柔晃动1-2分钟至管中仅剩一小块冰时，将其取出。
i.75%酒精擦拭冻存管表面后，将其放入生物安全柜中，拧开管盖，用1ml枪尖轻柔的将管中液体尽可能多的转移至15ml离心管中，用1ml心肌细胞复苏液轻柔冲洗冻存管，以5秒钟一滴的速度将冲洗液缓慢滴加入15ml离心管，边滴加边轻柔晃动离心管。
j.再用枪尖以同样速度，滴加1ml心肌细胞复苏液至15ml离心管，边滴加边轻柔晃动离心管。
k.用移液管由慢（2秒钟一滴）到快的滴加9ml心肌细胞复苏液，同时轻柔晃动离心管。300g离心5分钟。
l.在生物安全柜内吸除上清，用2ml移液管取1ml心肌细胞复苏液轻柔吹打细胞沉淀3-5次后，将其加入6孔板中，前后左右十字晃动混匀（可按比例稀释计数）。
m.显微镜下观察，细胞均匀分布。
n.在6孔板上标记好细胞名称、日期以及操作人员后，将其放入细胞培养箱，再次前后左右晃动混匀，放入细胞培养箱种培养24-48小时至绝大多数细胞贴壁后即可换液为心肌细胞培养基。
重要提醒：心肌细胞复苏计数后，可按需求接种至需要的培养容器；
心肌细胞培养时，按照推荐的密度接种，能够抑制成纤维细胞生长速度；
重要提醒：心肌细胞复跳后，建议继续培养1-2天稳定细胞状态。 |
| 心肌细胞维持 | a.将心肌细胞培养基室温平衡30分钟。
b.将心肌细胞用心肌细胞培养基培养，每48小时换液一次。更换时，贴壁加入培养基避免刮碰细胞；亦可加入标准量150%的心肌细胞培养基，每72小时换液一次。
重要提醒：细胞在6-8周内性状稳定。如果需要长期培养，为了维持细胞稳定性和纯度，需要定 期采用心肌细胞纯化液进行处理,一般每6周处理一次 |
备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考 客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术服务电话：400-080-3389 按 2，我们随时给予解答。 |
| 三、注意事项 |
| 重要提醒 | 1.培养基于4℃条件下可保存3-6个月。 2.在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。 3.传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。 4.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 |
| 到货须知 | 1.收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 |
| 四、售后服务 |
| 重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发； 2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发； 3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发； 4.常温发货的细胞静置 2 小时后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发； 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封，出现污染，经核实后，重发； 6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发； 7.视具体情况而定。 |
| 不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染，不重发； 2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发； 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发； 4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发； 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发； 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发； 7.视具体情况而定。 |
