一、细胞基本属性 |
细胞名称 | hPSC来源心肌细胞iCM-H1 |
种属来源 | 人 |
细胞来源 | 人胚胎干细胞H1 |
产品规格 | 1×10×6cells/T25或1mL冻存管 |
培养基 | CM维持培养基(含CM维持基础培养基,货号IMI-CM01M1 ;CM维持培养基补充剂(25×),货号IMI-CM01MA) |
生长条件 | 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
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生长特性 | 贴壁生长
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细胞形态 | 细胞胞体则呈现不规则形状,如多角形,部分细胞有聚集倾向,具有搏动能力
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冻存细胞 | 冻存细胞存于-80℃冰箱,2周有效期;长期需液氮储存 |
生长视频 | |
产品货期 | 现货,1周左右 |
运输方式 | T25培养瓶/ 顺丰快递(包邮) |
供应限制 | 仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主 |
二、细胞培养操作 |
需要材料 | 1.DPBS, No Calcium, No Magnesium 2.RPMI1640 3.FBS
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心肌细胞进行再接种 | a.如果需要将心肌细胞按合适密度接种到新的培养皿/瓶中,可对心肌细胞进行再接种,再接种操作会导致20%左右的细胞死亡,即损失20%的细胞。 b.室温平衡心肌细胞复苏液、DPBS溶液,37℃预热心肌细胞消化液。 c.取出心肌细胞铺板液包被过的培养皿/瓶,吸去心肌细胞铺板液并加入适量心肌细胞复苏液,置于5%CO 2 的37℃恒温细胞培养箱中。 d.吸除心肌细胞培养基,加入DPBS溶液清洗一次。 e.移除DPBS,加入预热的心肌细胞消化液使之完全覆盖皿/瓶底。 f.37℃孵育3-5分钟,显微镜下观察到大部分细胞相互分离,表明达到理想的消化时间。 g.向皿/瓶中加入消化液3-5倍体积的RPMI1640+10%FBS终止消化,用枪扇形吹打培养皿/瓶底,使皿/瓶底贴附的心肌细胞脱落,将细胞转移至15ml 离心管中,再加入适量中和液冲洗皿/瓶底,收集剩余细胞加入15ml离心管中,300g离心5分钟。 I .小心移除上清,用心肌细胞复苏液重悬细胞,轻柔吹打混匀,并接种到包被过的培养皿/瓶中,十字晃动使细胞均匀分布。 II.5%CO 2 的37℃恒温培养箱中培养24-48小时后,更换为心肌细胞培养基继续培养。 III.心肌细胞需要在二氧化碳培养箱中继续培养2-8天恢复搏动;此期间心肌细胞需要每隔48h换一次心肌细胞培养基。 重要提醒:吹打力度要轻柔,避免损伤细胞。亦可用心肌细胞培养基+10%FBS终止消化。 |
培养材料准备 | 心肌细胞铺板液包被培养皿/瓶:在4℃冰面上,往培养皿/瓶中添加心肌细胞铺板液至完全覆盖皿/瓶底(建议1ml/六孔板单孔),37℃包被1小时。如果暂时不用,可用塑封膜封口后2-8℃储存,并于1周内使用,保存期间心肌细胞铺板液需始终保持完全覆盖皿底。 重要提醒:操作时需要将铺板液始终置于冰上;正确操作下铺板液应呈清亮,若操作时间过长或温度过高,铺板液会变得粘稠甚至呈胶状,不宜使用。 |
心肌细胞复苏(适用于冻存的细胞) | a.将心肌细胞复苏液从4°C冰箱中取出,室温平衡30分钟。 b.打开水浴锅,设定温度为37°C。 c.开启生物安全柜进行紫外灭菌30分种。 d.在冰上将1ml心肌细胞铺板液加入6孔板的一个孔中(0.1ml/cm 2 ),随即前后左右晃动6孔板,使铺板液均匀覆盖孔的表面。 e.将剩余铺板液迅速放回冰箱,将6孔板放入细胞培养箱中孵育1小时。 f.取出孵育好的6孔板,放于生物安全柜中,吸除心肌细胞铺板液后,立刻在孔内加入1ml 心肌细胞复苏液。 g.从高效液氮储存罐中取出需要复苏的细胞,将其放于干冰中暂存。 h.从干冰中取出细胞,迅速将冻存管的下1/2没入水浴锅中,轻柔晃动1-2分钟至管中仅剩一小块冰时,将其取出。 i.75%酒精擦拭冻存管表面后,将其放入生物安全柜中,拧开管盖,用1ml枪尖轻柔的将管中液体尽可能多的转移至15ml离心管中,用1ml心肌细胞复苏液轻柔冲洗冻存管,以5秒钟一滴的速度将冲洗液缓慢滴加入15ml离心管,边滴加边轻柔晃动离心管。 j.再用枪尖以同样速度,滴加1ml心肌细胞复苏液至15ml离心管,边滴加边轻柔晃动离心管。 k.用移液管由慢(2秒钟一滴)到快的滴加9ml心肌细胞复苏液,同时轻柔晃动离心管。300g离心5分钟。 l.在生物安全柜内吸除上清,用2ml移液管取1ml心肌细胞复苏液轻柔吹打细胞沉淀3-5次后,将其加入6孔板中,前后左右十字晃动混匀(可按比例稀释计数)。 m.显微镜下观察,细胞均匀分布。 n.在6孔板上标记好细胞名称、日期以及操作人员后,将其放入细胞培养箱,再次前后左右晃动混匀,放入细胞培养箱种培养24-48小时至绝大多数细胞贴壁后即可换液为心肌细胞培养基。 重要提醒:心肌细胞复苏计数后,可按需求接种至需要的培养容器; 心肌细胞培养时,按照推荐的密度接种,能够抑制成纤维细胞生长速度; 重要提醒:心肌细胞复跳后,建议继续培养1-2天稳定细胞状态。 |
心肌细胞维持 | a.将心肌细胞培养基室温平衡30分钟。 b.将心肌细胞用心肌细胞培养基培养,每48小时换液一次。更换时,贴壁加入培养基避免刮碰细胞;亦可加入标准量150%的心肌细胞培养基,每72小时换液一次。 重要提醒:细胞在6-8周内性状稳定。如果需要长期培养,为了维持细胞稳定性和纯度,需要定 期采用心肌细胞纯化液进行处理,一般每6周处理一次 |
备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考 客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打技术服务电话:400-080-3389 按 2,我们随时给予解答。 |
三、注意事项 |
重要提醒 | 1.培养基于4℃条件下可保存3-6个月。 2.在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。 3.传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。 4.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 |
到货须知 | 1.收到细胞后,首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照(当天以及第 2,3 天请拍照),记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。 |
四、售后服务 |
重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发; 2.收到细胞未开封,如出现污染状况,重发; 3.收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发; 4.常温发货的细胞静置 2 小时后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发; 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封,出现污染,经核实后,重发; 6.细胞活性问题,请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发; 7.视具体情况而定。 |
不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染,不重发; 2.客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发; 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发; 4.细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片,不重发; 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发; 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发; 7.视具体情况而定。 |