产品描述
运动神经元细胞IMN-H1维持培养基是一种适用于人类运动神经元(Human motor neuron, hMN)，无血清，无动物源成分的完全培养基，hMN 在本培养基中可以持续存活并成熟为表达CHAT的成熟MN，适用于体外研究。
产品信息
表1. MN维持培养基组成信息
注：括号内容如50×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如MN维持培养基补充剂(50×)需添加进MN维持基础培养基使其稀释50倍，使得补充剂终浓度为1×，配成MN维持培养基。
实验试剂与材料
表2. 推荐试剂&材料
实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)
一、完全培养基配制
(1) 在 4℃解冻MN维持培养基补充剂(50×)，不要在 37℃条件下解冻。
(2) 在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为49 mL MN维持基础培养基+1mL MN维持培养基补充剂(50×)配成MN维持培养基。
(3) 分化培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。
注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。
二、MN复苏
(1) 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)混合均匀。在300g条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)后吹匀。
(2) 将所有细胞悬液加入含适量MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)的基质胶或laminin 521包被的六孔板(1孔)中培养过夜。
(3) 24h后，换成不含IMC-014-Y的MN维持培养基(MN贴壁不牢固，换液动作需轻缓)，视培养基颜色或隔2天换液。
三、细胞传代(当有实验需求时可按培养器皿底面积1:1比例接种传代)
(1) 弃去培养基，加入1-2 mL Accutase(含10μM IMC-014-Y)，置于37℃培养箱消化2-5min。
(2) 2-5 min后每孔加入等量 MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)，轻轻吹打细胞，使细胞解离成单细胞。
(3) 将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心3 min。
(4) 仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的MN维持培养基重悬细胞(含10μM IMC-014-Y)，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。
(5) 使用MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)稀释细胞，将细胞以1:1比例接种到基质胶或laminin 521包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培养过夜(按底面积算，1个T25相当于六孔板2.5个孔，六孔板1孔可传12孔板的2孔，24孔板的4孔，96孔板的6孔)。24h后，换成不含IMC-014-Y的MN维持培养基(MN贴壁不牢固，换液动作需轻缓)，视培养基颜色或隔2天换液。
注：①MN不能扩增，尽量减少传代。
