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Steminduce系列
运动神经元细胞IMN-H1维持培养基

运动神经元细胞IMN-H1维持培养基

货号:IMI-MN01M

价格:
 2680元

规格:

货期:现货

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产品描述

运动神经元细胞IMN-H1维持培养基是一种适用于人类运动神经元(Human motor neuron, hMN),无血清,无动物源成分的完全培养基,hMN 在本培养基中可以持续存活并成熟为表达CHAT的成熟MN,适用于体外研究。

产品信息

表1. MN维持培养基组成信息

微信截图_20240919094814.jpg

注:括号内容如50×为母液浓度,使用时终浓度需为1×。例如MN维持培养基补充剂(50×)需添加进MN维持基础培养基使其稀释50倍,使得补充剂终浓度为1×,配成MN维持培养基。

实验试剂与材料

表2. 推荐试剂&材料

微信截图_20240919094836.jpg

实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)

一、完全培养基配制

(1) 在 4℃解冻MN维持培养基补充剂(50×),不要在 37℃条件下解冻。

(2) 在生物安全柜中,按照实验用量,例如若用量为50 mL,配制方法为49 mL MN维持基础培养基+1mL MN维持培养基补充剂(50×)配成MN维持培养基。

(3) 分化培养基建议现配现用,置于 4℃储存,2 周内使用。

注:补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、MN复苏

(1) 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)混合均匀。在300g条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)后吹匀。

(2) 将所有细胞悬液加入含适量MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)的基质胶或laminin 521包被的六孔板(1孔)中培养过夜。

(3) 24h后,换成不含IMC-014-Y的MN维持培养基(MN贴壁不牢固,换液动作需轻缓),视培养基颜色或隔2天换液。

三、细胞传代(当有实验需求时可按培养器皿底面积1:1比例接种传代)

(1) 弃去培养基,加入1-2 mL Accutase(含10μM IMC-014-Y),置于37℃培养箱消化2-5min。

(2) 2-5 min后每孔加入等量 MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y),轻轻吹打细胞,使细胞解离成单细胞。

(3) 将细胞悬液收集到15 mL离心管中,室温下300 g离心3 min。

(4) 仔细抽吸上清液,不干扰细胞,用1mL恢复室温的MN维持培养基重悬细胞(含10μM IMC-014-Y),轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

(5) 使用MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)稀释细胞,将细胞以1:1比例接种到基质胶或laminin 521包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培养过夜(按底面积算,1个T25相当于六孔板2.5个孔,六孔板1孔可传12孔板的2孔,24孔板的4孔,96孔板的6孔)。24h后,换成不含IMC-014-Y的MN维持培养基(MN贴壁不牢固,换液动作需轻缓),视培养基颜色或隔2天换液。

注:①MN不能扩增,尽量减少传代。

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