hPSC来源运动神经元细胞iMN-H1

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)的基质胶或laminin包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培养过夜。24h后，换成不含IMC-014-Y的MN维持培养基(MN贴壁不牢固，换液动作需轻缓)，视培养基颜色或隔2天换液。

(当有实验需求时可按培养器皿底面积1:1比例接种传代)

a、弃去培养基，加入1-2 mL Accutase(含10μM IMC-014-Y)，置于37℃培养箱消化2-5min。

b、2-5 min后每孔加入等量 MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)，轻轻吹打细胞，使细胞解离成单细胞。

c、将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心5 min。

d、仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的MN维持培养基重悬细胞(含10μM IMC-014-Y)，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

e、使用MN维持培养基(含10μM IMC-014-Y)稀释细胞，将细胞以1:1比例接种到基质胶或laminin包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培养过夜(按底面积算，1个T25相当于六孔板2.5个孔，六孔板1孔可传12孔板的2孔，24孔板的4孔，96孔板的6孔)。24h后，换成不含IMC-014-Y的MN维持培养基(MN贴壁不牢固，换液动作需轻缓)，视培养基颜色或隔2天换液。

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。

4. 客户可购买逸漠生物MN维持培养基(含MN维持基础培养基，货号IMI-MN01M1 ;MN维持培养基补充剂，货号IMI-MN01MA )。

5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

6.该细胞仅供科研使用。

备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发；

3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发；

4.常温发货的细胞静置 2 小时后，干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发；

5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，出现污染，经核实后，重发；

6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发；

7.视具体情况而定。

1.客户操作造成细胞污染，不重发；

2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发；

3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发；

5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发；

6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发；

7.视具体情况而定。