hPSC来源运动神经元祖细胞iMNP-H1维持培养基使用说明书下载
产品描述
hPSC来源运动神经元祖细胞iMNP-H1维持培养基是一种适用于人类运动神经元祖细胞（Human motor neuron progenitor, hMNP），无血清，无动物源成分的完全培养基，hMNP 在本培养基中可以持续存活并至少在5代内维持Olig2的高表达，适用于体外研究。
产品信息
表1. MN维持培养基组成信息
注：括号内容如200×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如MNP维持培养基补充剂A（200×）以及补充剂B（50×）需添加进MNP维持基础培养基使其分别稀释200倍和50倍，使得补充剂终浓度为1×，配成MNP维持培养基。
实验试剂与材料
表2. 推荐试剂&材料
实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)
一、完全培养基配制
一、完全培养基配制
(1)在 4℃解冻MNP维持培养基补充剂A（200×）、MNP维持培养基补充剂B（50×），不要在 37℃条件下解冻。
(2)在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为48.75 mL MNP维持基础培养基+0.25 mL MNP维持培养基补充剂A（200×）+1 mL MNP维持培养基补充剂B（50×）配成MNP维持培养基。
(3)培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。
注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。
二、MN复苏
(1)将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL MNP维持培养基（含10μM IMC-014-Y）混合均匀。在300g条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL MNP维持培养基（含10μM IMC-014-Y）后吹匀。
(2)将所有细胞悬液加入含适量MNP维持培养基（含10μM IMC-014-Y）的基质胶或laminin 521包被的六孔板（1孔）中培养过夜。
(3)24h后，换成不含IMC-014-Y的MNP维持培养基，视培养基颜色或隔2天换液。
三、细胞传代(当有实验需求时可按培养器皿底面积1:1比例接种传代)
(1)弃去培养基，每孔加入1mL Accutase（含10μM IMC-014-Y），置于37℃培养箱消化4-5min。
(2)4-5 min后每孔加入等量 MNP维持培养基（含10μM IMC-014-Y），轻轻吹打细胞，使细胞解离成单细胞。
(3)将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心3 min。
(4)仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的MNP维持培养基重悬细胞（含10μM IMC-014-Y），轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。
(5)使用MNP维持培养基（含10μM IMC-014-Y）稀释细胞，以1:6比例（按底面积换算）接种到基质胶包被的六孔板或35mm皿中培养过夜。24h后，换成不含IMC-014-Y的MNP维持培养基，视培养基颜色或隔2天换液。
