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Steminduce系列

神经干祖细胞iNSPC-H1扩增培养基

货号:IMI-SP01AM

价格:
 2680元

规格:

货期:现货

  • 产品信息

神经干祖细胞iNSPC-H1扩增培养基使用说明书下载

产品描述

神经干/祖细胞(NSPC)扩增培养基是一种适用于人类神经干/祖细胞(Human Stem/progenitor Cell, hNSPC),无血清,无动物源成分的完全培养基,hNSPC 在本培养基中可以稳定增殖,同时细胞标志物表达正常(Nestin+ / SOX2 + / SOX1 +),适用于体外研究。

产品信息

表1. NSPC扩增培养基组成信息

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注:括号内容如25×为母液浓度,使用时终浓度需为1×。例如NSPC扩增培养基补充剂(25×)需添加进NSPC扩增基础培养基使其稀释25倍,使得补充剂终浓度为1×,配成NSPC扩增培养基。

实验试剂与材料

表2. 推荐试剂&材料

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实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)

一、完全培养基配制

(1)在 4℃解冻NSPC扩增培养基补充剂(25×),不要在 37℃条件下解冻。

(2)在生物安全柜中,按照实验用量,例如若用量为50 mL,配制方法为48 mL NSPC扩增基础培养基+2mL NSPC扩增培养基补充剂(25×)配成NSPC扩增培养基。

(3)分化培养基建议现配现用,置于 4℃储存,2 周内使用。

注:补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。

二、MN复苏

(1)将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL NSPC扩增培养基(含10μM Y-27632)混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL NSPC扩增培养基(含10μM Y-27632)后吹匀。

(2)将所有细胞悬液加入含适量NSPC扩增培养基(含10μM Y-27632)的低吸附六孔板(1孔)或低吸附35mm皿中培养过夜。

(3)24h后,100g离心弃去上清,换成不含Y-27632的NSPC扩增培养基,视培养基颜色或隔2天半量换液。

三、NSPC传代

当神经球直径达100-150μm时,即可进行传代培养。

(1)100g离心弃去上清,加入1-2 mL Accutase(含10μM Y-27632),置于37℃水浴消化10-15 min。

(2)10-15 min后每孔加入等量 NSPC扩增培养基,轻轻吹打细胞,使细胞解离成小团块或单细胞。

(3)将细胞悬液收集到15 mL离心管中,室温下300 g离心5 min。

(4)仔细抽吸上清液,不干扰细胞,用1mL恢复室温的NSPC扩增培养基重悬细胞,轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

(5)使用自动细胞计数器计数细胞,使用台盼蓝排除死亡细胞,使用NSPC扩增培养基稀释细胞,将细胞以5×10⁵/mL(或1:2-1:3比例)接种到低吸附六孔板中。

注:①当形成肉眼可见的神经球时,可将神经球摇晃至中心,缓慢倾斜一定角度,沿着液面缓慢弃去培养基,在不吸到神经球的情况下尽量将培养基吸尽,进行换液,尽量避免离心。②仅在复苏后培养第一天培养基需要加入Y27632,后续传代培养基不需要添加。

四、NSPC冻存


待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。

(1)收集细胞及细胞培养液,装入离心管中,100g离心5 min,弃上清液,加入1 mL Accutase(含10μM Y-27632)水浴消化15 min,。

(2)根据细胞数量加入神经细胞无血清冻存液,使细胞密度1×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

(3)将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注:建议六孔板每孔1 mL Accutase消化。

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