产品描述
神经干/祖细胞(NSPC)扩增培养基是一种适用于人类神经干/祖细胞（Human Stem/progenitor Cell, hNSPC），无血清，无动物源成分的完全培养基，hNSPC 在本培养基中可以稳定增殖，同时细胞标志物表达正常（Nestin+ / SOX2 + / SOX1 +），适用于体外研究。
产品信息
表1. NSPC扩增培养基组成信息
注：括号内容如25×为母液浓度，使用时终浓度需为1×。例如NSPC扩增培养基补充剂（25×）需添加进NSPC扩增基础培养基使其稀释25倍，使得补充剂终浓度为1×，配成NSPC扩增培养基。
实验试剂与材料
表2. 推荐试剂&材料
实验内容与方法(以6孔板1个孔为例)
一、完全培养基配制
(1)在 4℃解冻NSPC扩增培养基补充剂（25×），不要在 37℃条件下解冻。
(2)在生物安全柜中，按照实验用量，例如若用量为50 mL，配制方法为48 mL NSPC扩增基础培养基+2mL NSPC扩增培养基补充剂（25×）配成NSPC扩增培养基。
(3)分化培养基建议现配现用，置于 4℃储存，2 周内使用。
注：补充剂可根据使用量进行分装以避免反复冻融。
二、MN复苏
(1)将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL NSPC扩增培养基（含10μM Y-27632）混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL NSPC扩增培养基（含10μM Y-27632）后吹匀。
(2)将所有细胞悬液加入含适量NSPC扩增培养基（含10μM Y-27632）的低吸附六孔板（1孔）或低吸附35mm皿中培养过夜。
(3)24h后，100g离心弃去上清，换成不含Y-27632的NSPC扩增培养基，视培养基颜色或隔2天半量换液。
三、NSPC传代
当神经球直径达100-150μm时，即可进行传代培养。
(1)100g离心弃去上清，加入1-2 mL Accutase（含10μM Y-27632），置于37℃水浴消化10-15 min。
(2)10-15 min后每孔加入等量 NSPC扩增培养基，轻轻吹打细胞，使细胞解离成小团块或单细胞。
(3)将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心5 min。
(4)仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的NSPC扩增培养基重悬细胞，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。
(5)使用自动细胞计数器计数细胞，使用台盼蓝排除死亡细胞，使用NSPC扩增培养基稀释细胞，将细胞以5×10⁵/mL（或1:2-1:3比例）接种到低吸附六孔板中。
注：①当形成肉眼可见的神经球时，可将神经球摇晃至中心，缓慢倾斜一定角度，沿着液面缓慢弃去培养基，在不吸到神经球的情况下尽量将培养基吸尽，进行换液，尽量避免离心。②仅在复苏后培养第一天培养基需要加入Y27632，后续传代培养基不需要添加。
四、NSPC冻存
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
(1)收集细胞及细胞培养液，装入离心管中，100g离心5 min，弃上清液，加入1 mL Accutase（含10μM Y-27632）水浴消化15 min，。
(2)根据细胞数量加入神经细胞无血清冻存液，使细胞密度1×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
(3)将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注：建议六孔板每孔1 mL Accutase消化。
