| 一、细胞基本属性 |
| 细胞名称 | U251MG-FLUC-puro人类星型胶质瘤细胞(FLUC标记)（STR鉴定正确） |
| 细胞别称 | U251-MG-LUC；人类星形胶质瘤细胞-荧光素酶标记；人类星形胶质瘤细胞-LUC |
| 种属来源 | 人 |
| 组织来源 | 脑 |
| 生长特性 | 贴壁生长 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 背景介绍 | Luciferase U251细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。该细胞株性状稳定，培养时不需要添加抗生素维持。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。 U251MG细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。 U251细胞源自一位患者的胶质母细胞瘤组织。 |
| puro药筛浓度 | U251-MG-LUC-PURO细胞puro药筛浓度为0.5ug/ml，培养过程中可不用再添加puro，如若担心抗性随着传代时间降低，可定期用0.25ug/ml浓度puro维持，冻存和传代未贴壁时请勿加药。 |
| STR鉴定图片 |  |
| 生物安全等级 | 1 |
| 细胞规格 | 1x106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
| 支原体检测 | 无 |
| 保藏机构 | ECACC; 09063001 |
| 培养基 | 89%DMEM+10%FBS+PS+0.5ug/ml puro |
| 培养条件 | 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ |
| 冻存条件 | 无血清冻存液，液氮储存 |
| 细胞货期 | 现货，1周左右 |
| 运输方式 | 复苏发货（T25瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递 |
| 供应限制 | 仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
| 特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主 |
| 二、细胞培养操作 |
| 收货方式 | T25瓶 | 冻存管 |
| 收货处理 | 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态 | 收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏 |
| 传代密度 | 细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 | 第三天换液并检查细胞密度 |
| 传代比例 | 首次传代建议1：2传代
1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 | 一管细胞建议接种到6cm培养皿或者T25瓶 |
| 传代方法 | a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，用胰酶轻轻吹下来后，迅速后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 | 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。 |
| 注意事项 | 1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。 | 1.收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存；
2.为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。 |
| 到货须知 | 1.收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
4.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 |
| 备注：客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术服务电话：400-080-3389 按 2，我们随时给予解答。 |
| 三、细胞冻存操作 |
| 冻存液配方 | 无血清冻存液，液氮储存 |
| 细胞密度 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 |
| 冻存方法 | a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，加 1 mL血清重悬细胞，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
| 四、售后服务 |
| 重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发； 2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发； 3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发； 4.常温发货的细胞静置 2 小时后，干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发； 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，出现污染，经核实后，重发； 6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发； 7.视具体情况而定。 |
| 不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染，不重发； 2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发； 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发； 4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发； 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发； 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发； 7.视具体情况而定。 |
