| 一、产品说明 | ||||
| 产品名称 | Polybrene （聚凝胺） | |||
| 货号 | IMC-821-1 mL | |||
| 产品规格 | 10 mg/ mL *1 mL | |||
| 货期 | 现货 | |||
| 污染物监测 | 经过严格的内毒素、渗透压、病原体和 pH 检验，确保产品不含病菌、病毒以及支原体等 | |||
| 产品简介 | 聚凝胺（Polybrene）也称海美溴铵（hexadimethrine bromide）是一类高价离子季铵盐多聚物，溶解后带正电，与细胞表面的阴离子结合，能显著提高逆转录病毒对细胞的感染效率，一般能是高感染效率2~10倍。Polybrene目前广泛用于逆转录病毒及慢病毒介导的基因转染，是一种常用的促感染试剂，能显著提高病毒与细胞的接触及感染效率，其作用机理可能是通过中和细胞表面唾液酸与病毒颗粒之间的静电排斥从而促进吸附作用。同时，polybrene也常用于哺乳动物细胞的DNA转染实验以增强脂质体的转染效率，但Polybrene对某些细胞也是存在毒性的，因此，使用之前要先对细胞进行测试。Polybrene也是一种有名的抗肝素剂(肝素拮抗剂)，常用来生产非特异性凝集的红细胞。它还参与到低分子量DNA的转化中。此外，Polybrene也多用于蛋白测序，因为小剂量的Polybrene在自动测序分析可明显改善多肽的降解现象。PVDF膜加入polybrene还能提高膜的亲和性，降低测序过程中多肽的机械损伤。 本产品以溶液形式提供，粉末用0.9%NaCl配制成10 mg/mL的溶液，并用0.22 μm滤膜过滤除菌。使用时一般按1:1000-1:5000稀释，依细胞种类不同稀释比例不同，具体使用浓度请查阅相关文献或者预实验来摸索。 | |||
| 储存条件 | -20℃ | |||
| 运输条件 | 干冰运输 | |||
| 有效期 | 24个月 | |||
| 免责声明 | 本公司将不为任何不正常使用此产品时所发生的意外负责 | |||
| 二、使用说明 | ||||
| 一、逆转录病毒感染(Retroviral Infection) 1. 重组逆转录病毒原液的制备：取5 mL生长培养基(5%血清)加入含单层转染逆转录包装细胞的100 mm培养皿内。孵育24h后，吸去培养液并用0.45 μm滤器过滤。 2. 待感染细胞的培养：100 mm培养皿内加入10 mL培养基，细胞密度为5x105/皿。 3. 病毒感染：细胞培养24h后，吸去培养液。用含polybrene的2 mL病毒上清（或将病毒原液稀释到2 mL）感染细胞，polybrene的终浓度为5-10 μg/ml。37℃ 孵育3-6h。 4. 收集病毒颗粒：加入8 mL培养基。培养2-3天后，收集培养基上清，处理得到病毒颗粒。 二、转染 1. 完全生长培养基培养细胞，培养细胞密度约50%; 2. 孵育细胞18-24h后准备DNA-培养基-Polybrene混合液，按如下操作制备混合液： ①添加完全培养基（60 mm培养皿2 mL，100 mm培养3 mL）37℃预热； ②添加10 ng~10 ug质粒轻轻混匀； ③加入Polybrene至终浓度为5-10 μg/mL。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。 3.去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37℃ 孵育细胞6-20h。细胞培养的前6h内约每1.5h轻柔混匀。 4.去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution (15%DMSO in 1X HBSS )轻轻盖住细胞（60 mm培养皿3 mL，100 mm培养皿4 mL）。每次加入溶液时用手轻晃培养皿10s，使得液体均匀分布。然后37℃ 孵育细胞4min。 5.立即去除DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60 mm培养皿每次用5 mL培养液清洗，100 mm培养皿每次用10 mL培养液清洗。 6.加入完全培养基到细胞中。 7.蛋白表达：培养24-72 h后，根据需要收集细胞进行蛋白表达情况检测。 细胞筛选：培养24-72 h后，根据细胞状态，换新鲜的选择培养基，继续进行细胞筛选。 | ||||
| 四、注意事项 | ||||
| 1.为避免反复冻融，收到本产品或本产品配制成溶液后建议适当分装后-20℃保存。 2.因为Polybrene对某些细胞可能有一定的毒性，而且Polybrene长时间作用(大于12小时)也可能对某些细胞产生毒性，所以初次使用Polybrene处理细胞，建议先做毒性测试。 3.本产品可能对人体有一定的毒害作用，请注意适当防护，以避免直接接触人体或吸入体内。 4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 5.本产品仅供科研实验用，不做其它用途! | ||||
