产品简介
Zeocin即phleomycin D1，中文名称博来霉素或者腐草霉素D1，是从轮状链霉菌(Streptomyces verticillus)的一个突变体菌株中分离而来的博来霉素/腐草霉素(bleomycin/phleomycin)的抗生素家族成员。它对细菌、真菌(包括酵母)、植物和哺乳动物细胞均有抑制作用和细胞毒性。
Zeocin是一种碱性、水溶性的、铜离子螯合的糖肽抗生素。Cu2+螯合的Zeocin溶液呈现蓝色，无活性。当其进入细胞后，Zeocin上的Cu2+被还原为一价铜离子(Cu+)，并被细胞内的巯基化合物(sulfhydryl compound)清除，导致Zeocin被活化，能够结合到细胞内DNA上并使其断裂，最终导致细胞死亡。
对Zeocin产生抗性的蛋白是来源于印度链球菌(Streptoalloteichus hindustanus)的Shble基因编码一种14kDa大小的蛋白，它能够以一定比率结合Zeocin，使其不能结合细胞DNA，抑制其DNA断裂活性，从而使细胞对Zeocin产生抗性。因此，Zeocin可用来筛选表达Zeocin抗性基因的多克隆或单克隆细胞，或用于相应的多克隆或单克隆细胞的维持性培养。
Zeocin对于绝大多数好氧细胞均有效，常用于细菌(如大肠杆菌)、真核微生物(如酵母)及动植物细胞的筛选。大肠杆菌筛选推荐浓度为25~50μg/mL (低盐LB培养基，NaCl浓度不能超过5g/L)；酵母筛选推荐浓度为50~300μg/mL (YPD或基本培养基)；哺乳动物细胞筛选推荐浓度为50~1000μg/mL(合适培养基，根据细胞系的类型而不同)。实际应用时，应针对不同的细胞系测试Zeocin的浓度梯度，以确定最佳使用浓度。
产品信息
使用说明
1.细菌的筛选(以大肠杆菌为例)。
a.使用不含Tn5转座子元件的宿主细胞如Top10、DH5和DH10等进行筛选
b.需使用低盐LB培养基(10g胰蛋白胨，5g NaCl，5g酵母提取物，调整pH至7.5，加水定容至1L)以维持Zeocin的活性。
c.Zeocin筛选的推荐浓度为25~50μg/mL。
2.真菌的筛选(以酵母为例)。
a.适用于酿酒酵母和毕赤酵母。
b.培养基的选择：含1M山梨醇的YPD培养基(适用于电穿孔法转染细胞)；YPD或基本培养基(适用于化学法转染细胞)。调整培养基pH至6.5~8.0，并选择使用最低有效浓度的Zeocin进行筛选。
c.转染方法：需使用电穿孔或锂离子转染法。不要使用酵母原生质球(spheroplasting)进行Zeocin抗性的转染及筛选，因为Zeocin会导致原生质球的完全死亡。
d.Zeocin筛选的推荐浓度为50~300μg/mL。具体浓度与酵母菌株、培养基pH以及离子强度有关。
3.哺乳动物稳定表达细胞株的筛选。
Zeocin用于哺乳动物细胞筛选常用浓度为50-1000μg/mL (平均常用浓度为250-400μg/mL)。影响筛选浓度的主要因素包括离子强度、细胞类型、细胞生长密度以及生长速率。根据细胞类型的不同，需要1-2周可以筛选到Zeocin抗性的细胞。在筛选稳定表达细胞株之前，需要先确定能够杀死未转染细胞的Zeocin最佳工作浓度。Zeocin的最佳工作浓度需要通过剂量效应曲线来确定。下表中列出了部分细胞中Zeocin的筛选浓度范围以供参考。
表1. 部分常见哺乳动物细胞的Zeocin推荐筛选浓度表
注意事项
1.Zeocin人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
2.Zeocin对光敏感，需避光保存于-20℃。含有该抗生素的平板或培养基也需避光保存。
3.高离子强度、酸或碱性都会抑制Zeocin的活性，该抗生素在过高或过低pH及弱氧化剂的条件下不稳定，且变性不可逆。在培养细菌时，需适当降低细菌培养基的盐浓度(低盐LB培养基，NaCl浓度不能超过5g/L)并调整pH至7.5，从而使其保持活性。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。
