| 一、细胞基本属性 |
| 细胞名称 | 人乳腺癌肿瘤干细胞 |
| 种属来源 | 人 |
| 组织来源 | 乳腺癌 |
| 生长特性 | 贴壁生长 |
| 形态特征 | 不规则细胞 |
| 质量检测 | 不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等 |
| 产品规格 | 5x10 5cells/T25细胞培养瓶 |
| 培养基 | 人乳腺癌肿瘤干细胞专用培养基 |
| 培养条件 | 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ |
| 换液频率 | 每2-3天换液一次 |
| 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
| 产品货期 | 现货，1周左右 |
| 运输方式 | T25培养瓶/顺丰快递（包邮） |
| 供应限制 | 仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
| 背景介绍 | 乳腺癌是一种严重影响女性健康甚至危及生命的恶性肿瘤之一，其发生发展不仅是肿瘤细胞本身的作用，而且与肿瘤微环境密切相关。 乳腺癌作为女性最常见的恶性肿瘤之一，是发生在乳腺上皮组织的恶性肿瘤。发病常与遗传相关。乳腺癌细胞具有高度的异型性，细胞形态及大小不等。 乳腺癌干细胞 是一群未分化、具有自我更新、一定多系分化潜能的细胞，是第一个在实体瘤中被鉴定的肿瘤干细胞。乳腺癌干细胞起源的假说有以下两种，一种是乳腺癌干细胞起源于成体干细胞，通过遗传改变获得恶性行为，另一种是乳腺癌干细胞由早期祖细胞获得了自我更新能力转化而来。 |
| 二、细胞培养操作 |
| 收货处理 | 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态 |
| 复苏步骤 | 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。 |
| 传代密度 | 细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 |
| 传代步骤 | a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 |
| 细胞冻存 |
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考 客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术服务电话：400-080-3389 按 2，我们随时给予解答。 |
| 三、注意事项 |
| 重要提醒 | 1.培养基于4℃条件下可保存3-6个月。 2.在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。 3.传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。 4.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 |
| 到货须知 | 1.收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 |
| 四、售后服务 |
| 重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发； 2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发； 3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发； 4.常温发货的细胞静置 2 小时后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发； 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封，出现污染，经核实后，重发； 6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发； 7.视具体情况而定。 |
| 不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染，不重发； 2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发； 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发； 4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发； 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发； 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发； 7.视具体情况而定。 |
