LNCaP细胞生长记录
一、细胞基本属性 | ||||
细胞名称 | LNCaP人前列腺癌细胞 (STR鉴定正确) | |||
细胞别称 | LNCaP;人前列腺癌细胞 | |||
种属来源 | 人 | |||
年龄性别 | 男;50岁 | |||
组织来源 | 前列腺;左锁骨淋巴结癌转移灶 | |||
生长特性 | 贴壁生长 | |||
细胞形态 | 上皮细胞样 | |||
细胞代数 | 10代以内 | |||
背景介绍 | LNCaP细胞由HoroszewiczJS于1977年从一名50岁的明确诊断为转移性前列腺癌的白人男性患者的左锁骨上淋巴结细针穿刺的活体组织中分离建立的。5-α-双氢睾酮可影响该细胞的生长和酸性磷酸酶的产生。该细胞不形成均一的单层而是成簇生长,所以传代的时候要反复吹打形成单个细胞;该细胞贴壁不牢,达不到汇合状态,而且会使培养基迅速变酸;传代后48h内一定要保持培养瓶静止,如果此时挪动培养瓶,会使大部分细胞从瓶底脱落。如果出现此种情况,需要重新孵育24~48h使细胞重新贴壁,细胞贴壁后可更换培养基。 | |||
特别注意 |
1.该细胞贴壁性差,生长需要用到0.1% 的明胶(或0.1mg/ml多聚赖氨酸)包被的培养瓶或使用Corning的cellbind细胞培养瓶。 2.该细胞长得较慢,复苏和传代后需24-48小时贴壁。该细胞贴壁不牢,仅仅轻轻地吸附在皿底上,不形成汇合,很快使培养基变酸,应及时换液。生长较慢,传代后48小时内最好不要移动。 3.细胞封包、寄出时,罐装运输后通常多数细胞从培养瓶底分离,悬浮在培养基中。收到后,静置6-8h以使细胞再贴壁,此后换上新鲜培养液。如仍有细胞漂浮,需将培养瓶上清及贴壁细胞收集,1000rpm离心5分钟,用新鲜培养液重悬并培养到一个6cm培养皿或T25培养瓶中。 | |||
STR位点信息 | Amelogenin:X,Y;CSF1PO:10,11;D13S317:10,12;D16S539:11;D18S51:9,11,12;D19S433:13.2,15;D21S11:29,32.2;D2S1338:16,17;D3S1358:16;D5S818:11,12;D7S820:8.1,9.1,10.3;D8S1179:12,14;FGA:19,20;TH01:9;TPOX:8,9;vWA:16,18; | |||
STR鉴定位点图 | ||||
使用权限 | A类 | |||
细胞规格 | 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 | |||
支原体检测 | 无 | |||
保藏机构 | 中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心 | |||
培养基 | RPMI-1640+10%FBS+PS | |||
培养条件 | 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ | |||
冻存条件 | 无血清冻存液,液氮储存 | |||
染色体 | 72~88,XY | |||
细胞货期 | 现货,1周左右 | |||
运输方式 | 复苏发货(T25瓶免运输费用)/ 冻存发货(需加干冰运输费用) 顺丰快递 | |||
供应限制 | 仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 | |||
特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主 | |||
二、细胞培养操作 | ||||
收货方式 | T25瓶 | 冻存管 | ||
收货处理 | 观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h,以便稳定细胞状态 | 收到细胞后,需立即转入液氮冻存或直接复苏 | ||
传代密度 | 细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养 | 第二天换液并检查细胞密度 | ||
传代比例 |
首次传代建议1:2传代 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 |
一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶 | ||
传代方法 |
a、收集细胞培养上清:抽出瓶中的培养基和悬浮的细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清,细胞重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。 b、剩下贴壁的细胞,用不含钙、镁离子的PBS轻轻润洗(注意不要将细胞吹下)细胞1次。 c、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -2min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 d、按3mL/瓶补加培养基,轻轻打匀吹下细胞后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。 e、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养中。 |
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 | ||
注意事项 |
1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。 |
1.收货时若发现干冰化完,检查冻存管是否融化,若已融化需直接离心细胞接种观察,若未融化可以将细胞按正常步骤保存; 2.为保证细胞的高存活率,收到产品后,请立即解冻复苏细胞。 |
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到货须知 |
1.收到细胞后,首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。
3.由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 |
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备注:客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打技术服务电话:400-080-3389 按 2,我们随时给予解答。 | ||||
三、细胞冻存操作 | ||||
冻存液配方 | 无血清冻存液,液氮储存 | |||
细胞密度 | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 | |||
冻存方法 |
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心5 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
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注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 | |||
四、售后服务 | ||||
重发标准 |
1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发; 2.收到细胞未开封,如出现污染状况,重发; 3.收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发; 4.常温发货的细胞静置 2 小时后,干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发; 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后,出现污染,经核实后,重发; 6.细胞活性问题,请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发; 7.视具体情况而定。 |
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不予重发 |
1.客户操作造成细胞污染,不重发; 2.客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发; 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发; 4.细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片,不重发; 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发; 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发; 7.视具体情况而定。 |
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