一、细胞基本属性 |
细胞名称 | NK-92MI(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞)(STR鉴定正确) |
细胞别称 | NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-Hil2 |
种属来源 | 人 |
年龄性别 | 50岁;男性 |
组织来源 | 外周血 |
生长特性 | 悬浮生长 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
重要提醒 | 1.该细胞复苏后需一周左右时间方可恢复状态,冻存时密度尽量大些。 2.培养过程中有少量细胞分泌物属于正常现象,不影响细胞生长。 3.传细胞时,细胞不能在培养箱外放太久,最好小于1 h 4.重悬细胞要轻柔,不要太剧烈 |
细胞代数 | 10代以内 |
背景介绍 | NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株。亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化。可能由于载体整合到基因组DNA中,转化是稳定的。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性;铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征:CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性;CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。其亲本IL-2依赖的细胞株NK-92细胞及另一株同样来源于NK-92细胞株的IL-2非依赖的细胞株NK-92CI都可从ATCC得到。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高,而亲本细胞不合成表达。1998年9月提交到ATCC的培养物污染了支原体,其后代通过BM细胞周期蛋白处理21天消除支原体。处理后6周,用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测,结果都呈阴性。 |
生物安全等级 | 2 |
细胞规格 | 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
支原体污染 | 无 |
保藏机构 | ATCC; CRL-2408 |
培养基 | NK-92MI完全培养基 |
培养条件 | 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ |
冻存条件 | 无血清冻存液,液氮储存 |
细胞货期 | 现货,1周左右 |
发货方式 | 复苏发货(免运输费用)/ 冻存发货(需加干冰运输费用) 顺丰快递 |
供应限制 | 仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主 |
二、细胞培养操作 |
收货方式 | T25瓶 | 冻存管 |
初步平衡 | 用75%酒精擦拭细胞瓶表面,放37度培养箱内静置培养2-4h,以便稳定细胞状态 | 无须平衡,直接放入-80冰箱(不超过一周)或者液氮罐保存,建议尽早复苏 |
传代密度 | 细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养 | 第三天换液并检查细胞密度 |
传代比例 | 首次传代建议1:2传代,1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 | 一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶 |
传代方法 | 摇晃培养瓶,使细胞粗略混匀,取细胞计数,按每毫升2-3×105个活细胞的细胞密度进行全换液或半换液。每48 h传一次。 | 37℃水浴融化后,850 rpm离心5 min,弃冻存液,加入培养基重悬,在培养瓶中培养,起始密度为每毫升2-3×105个细胞 |
注意事项 | 悬浮细胞收货注意事项: 1、收货时需镜下拍照(看密度、状态) 2、静置后需镜下拍照(看整体密度) a.如密度50%以下,建议换液并竖瓶培养 b.如密度50%-80%,建议换液培养,隔天观察密度 c.如密度90%,建议传代 3、换液及传代处理前,培养瓶竖着放置至少半小时(使细胞沉到瓶底);收集上清,必须将瓶内所有培养基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)润洗瓶底并收集!离心转速为1000rpm,5min。 4.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 5.因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。 | 1.收货时若发现干冰化完,检查冻存管是否融化,若已融化需直接离心细胞接种观察,若未融化可以将细胞按正常步骤保存; 2.为保证细胞的高存活率,收到产品后,请立即解冻复苏细胞。 |
到货须知 | 1.收到细胞后,首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照(当天以及第 2,3 天请拍照),记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。 |
备注:客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打技术服务电话:400-080-3389 按 2,我们随时给予解答。 |
三、细胞冻存操作 |
冻存液配方 | 无血清冻存液,液氮储存 |
细胞密度 | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 |
冻存方法 | 冻存液:10%DMSO+50%FBS+40%完全培养基,细胞计数后,取1×106~1×107个细胞,850 rpm离心5 min,弃原培养基,加入1 mL冻存液,轻轻混匀,标注封口后,放入冻存盒,置于-80℃ 24 h,隔天再置于液氮气象。 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
四、售后服务 |
重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发; 2.收到细胞未开封,如出现污染状况,重发; 3.收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发; 4.常温发货的细胞静置 2 小时后,干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发; 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后,出现污染,经核实后,重发; 6.细胞活性问题,请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发; 7.视具体情况而定。 |
不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染,不重发; 2.客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发; 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发; 4.细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片,不重发; 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发; 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发; 7.视具体情况而定。 |