| 一、细胞基本属性 |
| 细胞名称 | KLE 人子宫内膜癌细胞（STR鉴定正确） |
| 细胞别称 | KLE ；人子宫内膜癌细胞 |
| 种属来源 | 人 |
| 年龄性别 | 64岁，女 |
| 组织来源 | 子宫 |
| 生长特性 | 贴壁生长 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 细胞代数 | 10代以内 |
| 背景简介 | KLE细胞是源自一名64岁白人女性的子宫内膜肿瘤组织，由G·R·Richardson于1984年建系。KLE细胞染色体为非整倍体，数目范围在51-66之间。KLE细胞裸鼠植瘤后，其肿瘤标本在电镜下显示，细胞间见紧密相连，细胞表面具有微绒毛。KLE细胞形态特征与孕激素刺激后的子宫内膜相似。 |
| 生物安全等级 | 1 |
| 细胞规格 | 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
| 支原体检测 | 无 |
| 保藏机构 | ATCC; CRL-1622 BCRJ; 0365 |
| 培养基 | DMEM/F12+10% FBS+1%PS |
| 培养条件 | 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ |
| 冻存条件 | 无血清冻存液，液氮储存 |
| 倍增时间 | ~114 hours |
| 致瘤性 | Yes, Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells. |
| 抗原表达情况 | Blood Type O; Rh+ |
| 细胞货期 | 现货，1周左右 |
| 发货方式 | 复苏发货（免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递 |
| 供应限制 | 仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
| 特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主 |
| 二、细胞培养操作 |
| 收货方式 | T25瓶 | 冻存管 |
| 初步平衡 | 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，放37度培养箱内静置培养2-4h，以便稳定细胞状态 | 无须平衡，直接放入-80冰箱（不超过一周）或者液氮罐保存，建议尽早复苏 |
| 传代密度 | 细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 | 第三天换液并检查细胞密度 |
| 传代比例 | 首次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 | 一管细胞建议接种到6cm培养皿或者T25瓶 |
| 传代方法 | a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 | 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。 |
| 注意事项 | 1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。
| 1.收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存；
2.为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。 |
| 到货须知 | 1.收到细胞后，及时拍照记录有无漏液、浑浊或瓶身破损现象。
2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
4. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 |
| 备注：客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术服务电话：400-080-3389 按 2，我们随时给予解答。 |
| 三、细胞冻存操作 |
| 冻存液配方 | 无血清冻存液，液氮储存 |
| 细胞密度 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 |
| 冻存方法 | a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 |
| 四、售后服务 |
| 重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发； 2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发； 3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发； 4.常温发货的细胞静置 2 小时后，干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发； 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，出现污染，经核实后，重发； 6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发； 7.视具体情况而定。 |
| 不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染，不重发； 2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发； 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发； 4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发； 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发； 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发； 7.视具体情况而定。 |
