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4T1细胞培养方法

时间:2023-01-12 17:45:45 点击:2985次

4T1细胞培养说明书下载

4T1细胞背景简介

4T1细胞是从410.4瘤株中未经诱变筛得的6-硫鸟嘌噙抗性细胞株。当4T1细胞注射到BALB/c小鼠中时,4T1细胞会自发产生高转移肿瘤,可转移到肺、肝、淋巴结和大脑,同时在注射部位形成始发灶,诱导转移时不需要摘除始发灶。4T1细胞在BALB/c小鼠中的生长与转移特性与人体中的乳腺癌十分相近,这种肿瘤是人Ⅵ期乳腺癌的动物模型。4T1细胞诱导的肿瘤在手术后及未手术情况下转移的动力学相近,可以用作手术后及未手术模型。4T1细胞诱导的肿瘤模型跟其他肿瘤模型相比,由于4T1细胞的抗6-硫鸟嘌噙特性,微小的转移细胞团(少到仅仅1个)也可以在许多远端器官中检测到,没必要数淋巴结或称重器官。

小鼠乳腺癌细胞4T1形态

ATCC细胞库4T1细胞图片

ATCC细胞库4T1细胞图片

ATCC细胞库4T1细胞图片

ATCC细胞库4T1细胞图片

4T1细胞培养实验准备

提前开启紫外照射30min消毒灭菌,工作台开灯通风10min,用75%酒精擦拭台面。

器材耗材:玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色0-10ul;黄色20-200ul;蓝色100-1000ul)、滤器、吸管、多孔培养皿、6cm皿、10cm皿,培养瓶等。

试剂:DMEM培养液、缓冲液、PBS、消化液、血清、抗生素。

4T1细胞培养条件

形态特征:上皮细胞样,贴壁生长

培养基: 90%DMEM+10% FBS+PS

生长条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃

传代方法:1:2至1:3,每周 3次

冻存条件:无血清冻存液(或者冷冻保存液:90%血清,10%DMSO,现用现配),液氮储存

4T1细胞培养注意事项

1.运输4T1细胞用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

2.收到4T1细胞后第一次传代建议1:2传代 。注意: 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

4T1细胞养操作步骤

4T1细胞复苏方法

1.将含有1 mL4T1细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀;

2.在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后轻轻吹匀;

3.将所有4T1细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜);

4.第三天换液并检查4T1细胞密度。

4T1细胞传代方法

如果4T1细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。

3.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。

4T1细胞冻存方法

待4T1细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例

1.收集4T1细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,然后进行细胞计数。

2.根据4T1细胞数量对应加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。

3.将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

4T1小鼠乳腺癌细胞培养常见问题

1.小鼠4T1细胞不长怎么处理?

这些因素都会影响细胞长得慢:a.没有保证密度,细胞长不起来;b.操作时力度没控制好,将细胞吹碎,状态变差;c.血清质量不好,影响细胞生长。

2.4t1细胞形态特征?

4T1细胞形态特征为上皮细胞样,贴壁生长。

3.4t1细胞用高糖DMEM吗?

是的,用高糖DMEM。

4.4T1细胞能成瘤吗?

Yes,forms tumors and metastasizes in BALB/c mice.

5.小鼠4T1细胞传代密度是多少?

4T1细胞建议在生长至80%汇合度时即应传代,以免细胞状态变差。

6.4T1细胞培养出现小黑点,怎么处理?

如果在显微镜下观察到了小黑点,基本上可以将范围缩小到是细菌污染或者细胞碎片这两种情况。

到底是污染还是碎片,可从以下几个方面进行判断:

1) 运动性

很多会动的小黑点,只是发生布朗运动的细胞碎片。在显微镜下观察黑点大小和形状是否规则,是否运动,是做布朗运动还是呈直线型快速移动。如果黑点大小不规则,做布朗运动,黑点可能是细胞碎片(可能是细胞状态不佳或者消化过度引起的),也可能是血清反复冻融产生的蛋白沉淀引起的,也可能是细胞的代谢产物。

处理方法:消化离心弃上清后,PBS重悬洗洗,750rpm低速离心4分钟,重新铺下,铺回去镜下观察一下是不是干净的

如果黑点大小一致,快速移动,很可能是细菌污染。

2)培养基的浑浊度

如果在显微镜下无法辨认,那就交给时间吧。细胞培养基对于细菌来说是非常营养的大餐。一旦发生污染,细菌就会大量繁殖。培养基PH值迅速下降,培养基变黄且会变浑浊。通常在12小时内就可以发现,而在48小时内就非常明显。

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