Safe Harbor 靶向 CRISPR-Cas9 工具用于活体细胞的分子遗传学成像:表达成像报告基因的细胞的无创分子遗传成像是一种在临床前模型和患者中纵向监测癌细胞的生物分布和活力以及基于细胞的疗法的宝贵方法, 然而,用报告基因标记细胞通常依赖于使用将报告基因随机整合到基因组中的基因转移方法,这可能会导致不必要的甚至严重的不利影响,为了克服这个问题,我们开发了 CRISPR-Cas9 工具来编辑腺相关病毒位点 1 (AAVS1) 安全港的细胞,其中包含编码抗生素抗性基因和报告基因的大型供体构建体 (*6.3 kb) 用于生物发光 (BLI)和荧光成像...
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永生化小鼠胸腺上皮细胞的鉴定及功能研究:胸腺上皮细胞(TEC)作为胸腺内三维支架中的关键细胞,通过粘连性内切和各种细胞因子的释放,在T细胞前体的归巢,迁移和分化中起着关键作用,在这项研究中,分离小鼠TEC的原代培养物,并用TEC-specific抗体CK5和CK8进行鉴定,这些TEC通过猿猴病毒(SV)40大T抗原的逆转录病毒转导而永生化...
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人子宫内膜异位病灶来源的永生化基质细胞系的建立:子宫内膜异位症是一种良性的妇科疾病,具有明显的雌激素依赖性,无炎症反应,原发性子宫内膜异位症间质细胞在子宫内膜异位症研究中的应用受限于激素和细胞因子反应性的短寿命分化,本研究的目的是建立和表征永生化人子宫内膜异位基质细胞(ihESCs)...
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具有突变KRAS基因的癌细胞系研究:人类癌症的异质性是开发疗法的主要障碍,处理这种异质性的一种方法是测试大量来自患者的细胞系的常见漏洞,在一项此类研究中,RAS Initiative 研究人员构建了数十种表达突变 KRAS 的细胞系的 GFP 标记衍生物,NCI RAS计划中目前正在研究的其他细胞系...
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肝癌研究常用细胞系及其优化实验方案:绝大多数肝癌起始于肝细胞中,这也是通常意义的肝癌;肝纤维膜部位的癌症发生较少,较常见于年轻人中,且与肝炎病毒感染无关;引起肝癌发生的因素众多,其中60%的肝癌病例是由乙型和丙型肝炎病毒感染引起的,这其中又以乙型肝炎病毒感染居首,用于肝癌治疗的靶向药物,Sorafenib (Nexavar)：酪氨酸激酶抑制剂 (TKI)...
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前列腺癌研究常用细胞系及其优化实验方案;前列腺癌根据起始组织不同,分为如下几类,前列腺腺泡癌,前列腺导管癌,前列腺鳞状细胞癌,泌尿道上皮细胞癌,前列腺癌具有很强的种族偏好性,亚洲男性相对发病率较低,研究发现有多种因素与前列腺癌发病的发生具有关联性,如体重水平和其他肿瘤病史等,前列腺癌同样具有很强的遗传倾向:增加女性罹患乳腺癌几率的BRCA1/2基因,同样可增加男性患前列腺癌的可能性;与DNA修复机制相关的基因MSH2 和 MLH1,也被发现与前列腺癌高风险相关...
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乳腺癌研究常用细胞系及其优化实验方案:绝大多数乳腺癌都是起始于乳腺导管细胞,只有10%的乳腺癌起始于乳腺小叶细胞,另有一些罕见起源的乳腺癌种类,由于乳腺附近存在淋巴结和淋巴腺,这也是乳腺癌易于扩散转移的原因之一,用于乳腺癌治疗的靶向药物,特异性结合Human epidermal growth factor 2 (HER2)的单克隆抗体,主要有Trastuzumab (Herceptin)和Pertuzumab (Perjeta)...
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肺癌研究常用细胞系及其优化实验方案:肺癌可在肺部或呼吸系统的任何位置发生,所涉及的部位包括：鼻部和口腔,气管,左右支气管,肺组织,A549细胞特性免疫组化实验显示Karetin阳性;有研究显示该细胞系在不饱和脂肪酸比例较高的条件下,可以合成Lecithin...
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RAW 264.7细胞培养传代及冻存处理:需要准备培养基:DMEM+10%FBS+PS、培养皿、无血清冻存液,RAW 264.7细胞传代步骤如下,a、将含有1mLRAW 264.7细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀;b、在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀;c、然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜...
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RAW 264.7细胞分化处理步骤:1.轻拍几下培养皿;2.用1ml 的枪或者巴氏管把细胞吹下来;3.细胞吹下来后转移到15ml离心管;4.1200rpm(约250g) 离心3min;5.去上清,用新鲜培养基重悬细胞;6.按比例接种到新的培养皿中...
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原代细胞分离提取方法及注意事项:原代细胞分离的方法有悬浮离心法、直接组织块法、酶消化法、非酶消化法、机械分散法等,使用细胞分离酶时,请注意温度和湿度条件,如蛋白水解酶可以自动分解,因此建议在使用前立即将其溶解,并在冰上保存2℃～8℃...
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原代细胞如何传代培养及注意事项:原代细胞传代分为悬浮细胞和贴壁细胞传代,贴壁型细胞的传代过程:有两项核心工作:一是分割培养物,二是再接种,传代培养过程需注意,离体培养的细胞生命力比较脆弱,因此传代时细胞没有生长到培养瓶底壁面积的 80%以前,不要急于传代...
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