产品描述
心肌细胞冻存液是一种无动物成分、无血清,化学成分明确的细胞冻存液,可在稳定细胞表型和生长状态,提供最佳的细胞回收效率。冻存细胞可在液氮中长期保存(>5 年)。
产品信息
表1. 试剂盒组成信息
产品特性
1、即用型细胞冻存液
2、高安全性,病毒、病菌和支原体等污染可能性低
3、细胞存活率和活力高,批次性差异小
操作步骤
一、细胞冻存
(1) 常规方法收集对数期的细胞于离心管中。
(2) 根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。
(3) 将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中,300g,5 分钟离心收集培养细胞沉淀,彻底弃去离心管中的上清液。
(4) 加入适量的心肌细胞冻存液于离心管中,使细胞浓度约为 1x106-1x107/ml。轻柔地混匀细胞,制成细胞混合液。
(5) 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中,建议每管 1ml 或 1.5ml。
(6) 将分装好的细胞冻存管放入冻存盒中于-80℃冻存1天,第二天转移至液氮中保存。
二、复苏步骤
(1) 从液氮中取出冻存的细胞,立即放入 37℃水浴槽中快速解冻。
(2) 待冻存管中细胞混合液完全融化后,立即加入 1ml 细胞培养基(含10μM Y-27632)于冷冻管中与细胞混合,将其中的混合液移至含有约 5ml 该细胞培养基(含10μM Y-27632)的离心管中,300g,5 分钟离心收集冻存细胞沉淀,移去上清液(操作时小心,切勿将细胞沉淀移去)。
(3) 加入适量的新鲜细胞培养基(含10μM Y-27632),使用移液管缓缓加入到细胞沉淀,轻柔地混匀,将细胞混合液移至事先基质胶包被(1:100稀释)的培养容器中,24 h后换成不含 Y-27632的培养基进行培养,视培养基颜色或隔1-2天换液。
(4) 镜检细胞后,可根据各自研究的需要和方法经行细胞常规培养。
注意事项
(1) 本产品可常温运输,2-8℃保存,有效期12月,-20℃保存有效期24月
(2) 冻存细胞分装后,应尽快移入到-80℃超低温冰箱,室温时间不超过5分钟