一、细胞基本属性 | ||||
细胞名称 | MLE-12小鼠肺上皮细胞 | |||
细胞别称 | MLE12;MLE-12;小鼠肺上皮细胞 | |||
种属来源 | 小鼠 | |||
组织来源 | 正常肺组织 | |||
生长特性 | 贴壁生长 | |||
细胞形态 | 上皮细胞样 | |||
细胞代数 | 10代以内 | |||
细胞规格 | 1x106cells/T25或1mL冻存管 | |||
支原体检测 | 无 | |||
培养基 | DMEM/F12基础培养基 94%+优质胎牛血清 2%+GlutaMAX-1谷氨酰胺 1%+HEPES 1M Buffer solution 1%+P/S青霉素-链霉素 1%+ITS(胰岛素+转铁蛋白+硒)1%+氢化可的松 10nM+雌二醇 10nM | |||
培养条件 | 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ | |||
冻存条件 | 无血清冻存液,液氮储存 | |||
细胞货期 | 现货,1周左右 | |||
运输方式 | 复苏发货(T25瓶免运输费用)/ 冻存发货(需加干冰运输费用) 顺丰快递 | |||
供应限制 | 仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 | |||
特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主 | |||
二、细胞培养操作 | ||||
收货方式 | T25瓶 | 冻存管 | ||
收货处理 | 观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h,以便稳定细胞状态 | 收到细胞后,需立即转入液氮冻存或直接复苏 | ||
传代密度 | 细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养 | 第三天换液并检查细胞密度 | ||
传代比例 | 首次传代建议1:2传代 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 | 一管细胞建议接种到6cm培养皿或者T25瓶 | ||
传代方法 | a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗MLE-12细胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若MLE-12细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。 | 将含有1 mL MLE-12细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有MLE-12细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL完全培养基,培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。 | ||
注意事项 | 1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。 | 1.收货时若发现干冰化完,检查冻存管是否融化,若已融化需直接离心细胞接种观察,若未融化可以将细胞按正常步骤保存; 2.为保证细胞的高存活率,收到产品后,请立即解冻复苏细胞。 | ||
到货须知 | 1.收到MLE-12细胞后,首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。 3.由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 | |||
备注:客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打技术服务电话:400-080-3389 按 2,我们随时给予解答。 | ||||
三、细胞冻存操作 | ||||
冻存液配方 | 无血清冻存液,液氮储存 | |||
细胞密度 | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 | |||
冻存方法 | a、收集MLE-12细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,加 1 mL血清重悬细胞,进行细胞计数。 b、根据MLE-12细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 | |||
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 | |||
四、售后服务 | ||||
重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发; 2.收到细胞未开封,如出现污染状况,重发; 3.收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发; 4.常温发货的细胞静置 2 小时后,干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发; 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后,出现污染,经核实后,重发; 6.细胞活性问题,请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发; 7.视具体情况而定。 | |||
不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染,不重发; 2.客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发; 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发; 4.细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片,不重发; 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发; 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发; 7.视具体情况而定。 | |||
五、参考文献 | ||||
Azithromycin regulates Mettl3-mediated NF-κB pathway to enhance M2 polarization of RAW264.7 macrophages and attenuate LPS-triggered cytotoxicity of MLE-12 alveolar cells. Int Immunopharmacol. Published online June 14, 2024. 作者:Xu S, Xing J, Zheng L, et al. 细胞:MLE-12 2024年影响因子/JCR分区:5.6/Q1 |
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