| 一、细胞基本属性 |
| 细胞名称 | 小鼠脊髓神经元细胞 |
| 种属来源 | 小鼠 |
| 组织来源 | 脑 |
| 生长特性 | 贴壁生长 |
| 形态特征 | 神经元细胞样 |
| 质量检测 | NSE免疫荧光染色为阳性，纯度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等 |
| 产品规格 | 5x105cells/T25或1mL冻存管 |
| 培养基 | 小鼠脊髓神经元细胞完全培养基 |
| 培养条件 | 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ |
| 换液频率 | 每2-3天换液一次 |
| 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
| 产品货期 | 5-6周左右 |
| 运输方式 | T25培养瓶/ 顺丰快递（包邮） |
| 供应限制 | 仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
| 背景介绍 | 小鼠脊髓神经元细胞采用胶原酶&胰酶联合消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来，小鼠脊髓神经元细胞分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分，在椎管里面，上端连接延髓，两旁发出成对的神经，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形(蝴蝶型)灰质区，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经(称为脊神经)分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。神经系统最基本的结构和功能单位是神经元，即神经细胞，其大小和外观在中枢神经系统中差异很大。但都具有胞体和树突、轴突。胞体又叫核周体，内含神经丝、微管、内质网、游离核糖体和一个有明显核仁的核。一些大神经元突起的粗面内质网可用Nissl染色显示，在光镜下是灰蓝色斑块状，称为尼氏小体。树突和轴突是神经元的突起，能在神经元之间传递电冲动，突起的大小和形态各不相同，很难用常规的显微镜鉴别。脊髓组织内含有大量胶质细胞，神经元含量少，分离纯化难度大，且脊髓神经元细胞是高度分化的终末细胞，不能分裂增殖，培养要求高。刚接种的脊髓神经元呈圆形，体积小，透亮，无突起。培养2-3d，可见胞体增大，突起增多延长；培养6-7d，细胞体大饱满，突起明显增加延长并交织成网，光晕明显，立体感强。培养20d后，死亡细胞明显增加，细胞出现内空泡，突起粗细不均，甚至脱壁，发生细胞崩解。 |
| 二、细胞培养操作 |
| 收货处理 | 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态 |
| 传代特征 | 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群，建议收到细胞后尽快进行相关实验 |
| 传代比例 | 不传代 |
| 神经元细胞消化方法一 | 1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS（37℃预热）清洗细胞一次；
2.添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，37℃温浴1min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
3.用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4.待细胞完全贴壁后，培养观察，之后按换液频率更换新鲜的完全培养基（37℃预热）
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| 神经元细胞消化方法二 | 1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2.添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，4℃冰箱静置5min；消化后倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
3.用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4.待细胞完全贴壁后，培养观察，之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基（37℃预热）
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| 细胞收货脱落 | 1.收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2.添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min（或4℃ 冰箱静置5-7min）消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；
3.经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基（补加1%FBS，促进贴壁）重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4.待细胞完全贴壁后，培养观察，之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基（37℃预热）
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备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考 客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术服务电话：400-080-3389 按 2，我们随时给予解答。 |
| 三、注意事项 |
| 重要提醒 | 1.培养基于4℃条件下可保存3-6个月。 2.在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。 3.传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。 4.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 |
| 到货须知 | 1.收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 |
| 四、售后服务 |
| 重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发； 2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发； 3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发； 4.常温发货的细胞静置 2 小时后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发； 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封，出现污染，经核实后，重发； 6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发； 7.视具体情况而定。 |
| 不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染，不重发； 2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发； 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发； 4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发； 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发； 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发； 7.视具体情况而定。 |
