| 一、细胞基本属性 |
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细胞名称 | 小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC） |
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种属来源 |
C57BL/6 小鼠 |
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组织来源 |
骨髓 |
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生长特性 |
贴壁生长 |
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形态特征 |
成纤维细胞样 |
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质量检测 |
CD44免疫荧光染色为阳性，CD45免疫荧光染色为阴性，纯度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等 |
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产品规格 |
5x105cells/T25细胞培养瓶 |
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培养基 | 小鼠骨髓间充质干细胞专用培养基（IMP-M097） |
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培养条件 |
气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ |
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换液频率 |
每2-3天换液一次 |
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消化液 |
0.25%胰蛋白酶 |
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产品货期 | 现货，1周左右 |
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运输方式 |
T25培养瓶/ 顺丰快递（包邮） |
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供应限制 |
仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
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背景介绍 |
骨髓间充质干细胞是骨髓基质干细胞，对骨髓中的造血干细胞（HSC）不仅有机械支持作用，还能分泌多种生长因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）来支持造血。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)具有多向分化潜能，能促进间充质组织的再生，如：骨、软骨、肌肉、韧带、肌腱、脂肪及基质等组织。在骨髓中，BMSCs占骨髓有核细胞总数的0.001%~0.1%，含量极低。而同时，由于组织工程需要大量的种子细胞，从啮齿类动物骨髓分离BMSCs的技术上的难度限制了许多实验的开展。体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的BMSCs对组织工程及细胞的体内、体外实验显得至关重要。 |
标志物鉴定 (阳性指标：CD29，CD44，CD73，CD90，CD105， 阴性指标：CD14，CD34，CD45) |  |
三系分化结果 （逸漠专用三系分化试剂盒： 间充质干细胞成骨诱导分化试剂套装 （IMC-011）、 间充质干细胞成脂诱导分化试剂套装 （IMC-012） 间充质干细胞成软骨诱导分化试剂套装 （IMC-013）） |  |
| 二、细胞培养操作 |
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收货处理 |
取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态 |
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传代密度 |
细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 |
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传代比例 |
首次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 |
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传代方法 |
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
| 复苏细胞 |
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。 |
| 细胞冻存 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
| 辅助试剂 | 我们推荐使用小鼠骨髓间充质干细胞专用培养基（IMP-M097）作为体外培养小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）的培养基。 |
备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考
客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术服务电话：400-080-3389 按 2，我们随时给予解答。 |
| 三、注意事项 |
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重要提醒 |
1.培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2.在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3.传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 |
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到货须知 |
1.收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
3.由于运输的原因，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
4.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 |
| 四、售后服务 |
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重发标准 |
1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；
2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发；
3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发；
4.常温发货的细胞静置 2 小时后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发；
5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封，出现污染，经核实后，重发；
6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发；
7.视具体情况而定。 |
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不予重发 |
1.客户操作造成细胞污染，不重发；
2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发；
3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发；
5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发；
6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发；
7.视具体情况而定。 |
