一、细胞基本属性 |
细胞名称 | 小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC) |
种属来源 |
C57BL/6 小鼠 |
组织来源 |
骨髓 |
生长特性 |
贴壁生长 |
形态特征 |
成纤维细胞样 |
质量检测 |
CD44免疫荧光染色为阳性,CD45免疫荧光染色为阴性,纯度高于 90%,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等 |
产品规格 |
5x105cells/T25细胞培养瓶 |
培养基 | 小鼠骨髓间充质干细胞专用培养基(IMP-M097) |
培养条件 |
气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ |
换液频率 |
每2-3天换液一次 |
消化液 |
0.25%胰蛋白酶 |
产品货期 | 现货,1周左右 |
运输方式 |
T25培养瓶/ 顺丰快递(包邮) |
供应限制 |
仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
背景介绍 |
骨髓间充质干细胞是骨髓基质干细胞,对骨髓中的造血干细胞(HSC)不仅有机械支持作用,还能分泌多种生长因子(如IL-6,IL-11,LIF,M-CSF及SCF等)来支持造血。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)具有多向分化潜能,能促进间充质组织的再生,如:骨、软骨、肌肉、韧带、肌腱、脂肪及基质等组织。在骨髓中,BMSCs占骨髓有核细胞总数的0.001%~0.1%,含量极低。而同时,由于组织工程需要大量的种子细胞,从啮齿类动物骨髓分离BMSCs的技术上的难度限制了许多实验的开展。体外分离培养纯度高、活力强、生物特性均一的BMSCs对组织工程及细胞的体内、体外实验显得至关重要。 |
标志物鉴定 (阳性指标:CD29,CD44,CD73,CD90,CD105, 阴性指标:CD14,CD34,CD45) | ![kappframework-aDeWCr(1)(1).png](/static/upload/image/20240820/1724121402191294.png) ![大鼠骨髓间充质干细胞.png](/static/upload/image/20240819/1724053043786824.png) |
三系分化结果 (逸漠专用三系分化试剂盒: 间充质干细胞成骨诱导分化试剂套装 (IMC-011)、 间充质干细胞成脂诱导分化试剂套装 (IMC-012) 间充质干细胞成软骨诱导分化试剂套装 (IMC-013)) | ![小鼠骨髓间充质干细胞.png](/static/upload/image/20240819/1724053235952723.png) |
二、细胞培养操作 |
收货处理 |
取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态 |
传代密度 |
细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养 |
传代比例 |
首次传代建议1:2传代,1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 |
传代方法 |
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
3.将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
复苏细胞 |
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL完全培养基,培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。 |
细胞冻存 | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例; a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5x106~1x107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
辅助试剂 | 我们推荐使用小鼠骨髓间充质干细胞专用培养基(IMP-M097)作为体外培养小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的培养基。 |
备注:由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考
客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打技术服务电话:400-080-3389 按 2,我们随时给予解答。 |
三、注意事项 |
重要提醒 |
1.培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2.在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3.传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 |
到货须知 |
1.收到细胞后,首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照(当天以及第 2,3 天请拍照),记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
3.由于运输的原因,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
4.仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。 |
四、售后服务 |
重发标准 |
1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发;
2.收到细胞未开封,如出现污染状况,重发;
3.收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发;
4.常温发货的细胞静置 2 小时后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发;
5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封,出现污染,经核实后,重发;
6.细胞活性问题,请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发;
7.视具体情况而定。 |
不予重发 |
1.客户操作造成细胞污染,不重发;
2.客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发;
3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发;
4.细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片,不重发;
5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发;
6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发;
7.视具体情况而定。 |