产品描述
心肌细胞消化液是一种无血清,化学成分明确的细胞消化液,心肌细胞专用消化液可以直接用于贴壁心肌细胞,心肌组织,心肌细胞聚集体的消化,而保证细胞活性不变。
产品信息
表1. 试剂盒组成信息
产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 储存 |
IMC-508 | 心肌细胞消化液 | 100 mL | -20℃,3个月 |
产品特性
1、即用型细胞消化液
2、高安全性,病毒、病菌和支原体等污染可能性低
3、细胞存活率和活力高。
表2. 推荐试剂&材料
试剂&材料 | 品牌(e.g.) | 货号(e.g.) |
Y-27632 | 逸漠生物 | IMC-014-Y |
DMEM/F12培养基 | 逸漠生物 | IMC-205 |
PBS | 逸漠生物 | IMC-401 |
6孔细胞培养板 | NEST | N/A |
15 mL/50 mL离心管 | 硕华生物 | N/A |
10 μL/200 μL/1000 μL无菌吸头 | 佳顺生物 | N/A |
10mL/50mL移液管 | NEST | N/A |
Matrigel | Corning | 354277 |
操作步骤
一、贴壁细胞消化重新接种(可按实验所需密度重新接种)
(1) 弃去培养基,若基质胶包被,则每孔加入1mL 心肌细胞消化液 (货号IMI-M001X),置于37℃培养箱消化1-2 h。
(2) 消化结束后每孔加入等量CM维持培养基(含10μM IMC-014-Y),轻轻吹打细胞,使细胞解离成单细胞。
(3) 将细胞悬液收集到15 mL离心管中,室温下300 g离心3 min。
(4) 仔细抽吸上清液,不干扰细胞,用1mL恢复室温的CM维持培养基重悬细胞(含10μM IMC-014-Y),轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。
(5) 使用CM维持培养基(含10μM IMC-014-Y)稀释细胞,按实验所需细胞密度接种到基质胶包被的六孔板或35mm皿中培养过夜。24h后,换成不含IMC-014-Y的CM维持培养基,视培养基颜色或隔2天换液。
二、心肌细胞聚集体的消化
(1) 将心肌细胞聚集体50-100g离心3min后弃去上清,加入1.5-3毫升的心肌细胞消化液,转移至六孔板或其他培养器皿内(转移后心肌细胞消化液体积需没过心肌细胞聚集体)。于培养箱孵育3-4 h。
(2) 3-4 h后加入等量CM维持培养基(含10μM IMC-014-Y)中止消化,转移至15 mL离心管中轻轻吹打成单细胞。室温下300 g离心3 min。
(3) 仔细抽吸上清液,不干扰细胞,用1mL恢复室温的CM维持培养基重悬细胞(含10μM IMC-014-Y),轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。
(4) 使用CM维持培养基(含10μM IMC-014-Y)稀释细胞,按实验所需细胞密度接种到基质胶包被的六孔板或35mm皿中培养过夜。24h后,换成不含IMC-014-Y的CM维持培养基,视培养基颜色或隔2天换液。
注意事项
(1)本产品不适用在底面是laminin 521上生长的心肌细胞,若在laminin 521上生长,推荐0.25%胰蛋白酶消化液进行消化。
(2)本产品可用于直径小于300 um心肌细胞聚集体的消化。