产品简介
胶原酶（Collagenase）是一种蛋白酶，一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列（该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中）并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽，但胶原酶是唯一 一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。
本品来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶（更准确的称法为梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A），能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白，多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。该产品适用于人类肿瘤、小鼠肾脏、人类成人和胎儿脑、肺和许多其他上皮组织的解聚。它还被证明可有效用于肝脏和肾脏灌注研究、胰腺消化、非实质大鼠肝细胞的分离以及肝细胞的制备。 胶原酶已用于研究晚期糖基化终产物所需的动脉组织的制备。该酶已经测试可以约1 mg/mL的浓度释放肝细胞。
目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为五种类型：胶原酶I型，II型，III型，IV型和Ⅴ型。
在应用上有所偏向：
（1）胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；
（2）胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；
（3）胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；
（4）胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
本品为II型胶原酶，≥250 U/mg solid，可用于心、甲状腺、唾液腺、肝、骨、软骨等组织和细胞的解离。
酶活力单位定义
在37℃，pH7.5 的条件下，5 h内水解胶原产生相当于1 µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。
使用说明
1.胶原酶储存液的配制
（1）向每管100 mg的胶原酶中加入1 mL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca2+、Mg2+），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成100 mg/mL（即100×）的储存液。
（2）用低蛋白结合性的0.22 μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。
（3）使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5-2.5 mg/mL，用于软骨消化的常用浓度为1-2 mg/mL，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的
最佳工作浓度。
2.组织的分离
（1）使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4 mm大小的组织块；
（2）利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗涤组织块数次；
（3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；
（4）于37℃孵育4-18 h。消化时使用水平摇床以及用3 mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。
（5）已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；
（6）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；
（7）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
（8）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
3． 器官灌注
（1）向37℃预热的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入胶原酶，另添加3 mM的CaCl2有助于提高分离效率；
（2）按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；
（3）将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育；
（4）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；
（5）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
（6）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
注意事项
1.储存液-20℃避光冻存。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。
