1、培养的CHO细胞，在塑料基质的方瓶中贴壁和生长情况很好，形态也很正常，但是接入转瓶后贴壁情况很差，不伸展或伸展需要的时间很长，请问这主要是什么原因？
【参考回答】
能的原因有如下几点：
(1)细胞本身贴壁生长的能力较弱，一般细胞在塑料器皿上的贴附能力强于玻璃器皿，这样的话，就选择塑料器皿好了。
(2)培养液PH不好也会影响贴壁，配的时候加好缓冲试剂，不嫌麻烦的话调定PH在7.2左右。使用时间较长的培养液由于在空气中暴露时间长，ph会有变化
(3)消化时候处理不合适，比如胰酶消化过久，有EDTA的话，去除不干净也影响贴壁的。消化完了之后要吸干净消化液，用培养液漂洗细胞，或者吹下来之后离心，换加新鲜培养液
(4)血清也可能影响贴壁，细胞在胎牛血清中贴壁明显快于新生牛血清。
2、最近养CHO细胞，是从别人那里得来的。给我的时候细胞有一半是圆形一半是梭行的。但是养着养着就大部分成圆形，而且有的像荷包蛋一样，而那些还是梭形的细胞里面出现了空泡一样的东西，还有渐渐像融化了一样。是什么原因?
【参考回答】
估计很可能是支原体污染。
建议马上丢弃该细胞，因为支原体污染很难去除，为避免影响您实验室其他的细胞操作一定不要犹豫。您可以重新购买状态好的CHO细胞。
3、由于接种密度稍低一些，CHO细胞在2L转瓶中培养5天左右很难消化下来，即使消化下来也是成团的，请问为什么?加完血清的培养基又重新过滤了，会不会对细胞的生长速度有影响，一般培养三天就能张满。
【参考回答】
(1)首先考虑一下你的胰酶有没有问题，也有可能是胰酶的浓度不够。
(2)成团也可能是细胞太多了，因此在消化时应该延长消化的时间，同时传代时尽量吹散成单细胞悬液。
(3)消化后传代时多弃去些细胞试试，也可以多传几瓶，三瓶，四瓶都是可以的。
4、最近作试验需要用到CHO细胞，老师从广西带回两瓶，本来用的是DMEM培养液，由于我没有接触过细胞这方面的知识，上网查了下培养液，说1640就可以，就仓促用了1640，两天过去了贴壁很不好
【参考回答】
(1)带回来的细胞瓶汇合度大概多少?一般送人的细胞汇合度大概80-90%，且瓶里加满培养液，再包装。细胞生长旺盛，便于处理。加满培养液的目的是防止运输过程中倒置，细胞接触不到培养液而死亡或活力下降。培养时应该分瓶培养。我想你应该分瓶了吧，我们一般1:3分瓶。不分瓶培养可想而知了。
(2)如果上述没错的话，准备好正确的完全培养液，将生长不好的细胞瓶中的细胞消化收集，合并一下，铺底大概30%。正常培养。
(3)关键掌握住起始细胞的密度和严格的操作。因为这细胞已很常见。方法正确不存在长不好的问题。除非你的老师带回来的细胞存在问题。
【参考回答】
37度预热胰酶，吸除培养瓶中的培养液，PBS(无钙镁)洗涤细胞1次后，加入少量胰酶，覆盖细胞即可。轻轻摇动(前后左右)。镜下观察细胞状态，一旦出现细胞回缩形态变圆即停止消化(防止过渡消化)。加入完全培养液(必须含胎牛血清)终止消化反应。湾头吸管顺序吹打细胞，小心避免产生气泡(对细胞有害)。镜下观察细胞，细胞分散即可后续操作。如果是新手，保留上清以防不测，别倒掉。
5、要做稳定转染，表达融合蛋白并将蛋白质纯化来检测其功能。仅仅把目的基因插入pcDNA3.1，没有插入其他的基因或者tag。现准备转染CHO细胞。就相关问题想问问：
有的文献上没有署名K1或是DHFR,普通所写的CHO细胞是指那种?野生型CHO细胞又是指的哪种?这三种细胞是不是因为CHO-K1和CHO/DHFR-有扩增基因GS和DHFR，可以更为有效的扩增进而表达，比野生型CHO在转染中更起作用?
如果就我的实验要求，CHO-K1或者CHO/DHFR-更加适合，那么转染CHO-K1是不是可以直接转染?而转染CHO-DHFR-需要和携带DHFR-的标记质粒共转染?
【参考回答】
做稳定表达是需要把目的基因克隆到一定的载体上的，这个载体同时可以过表达一个抗性基因，如果载体整和到基因组上，这个抗性已经能够克服筛选压力，而这个时候你的目的蛋白也得到了有效的表达。
(1)野生型CHO就是CHO-K1
(2)CHO-DHFR-是指DHFR缺陷型细胞，DHFR作为筛选标记.
(3)你用pcDNA3.1的话,可以直接转染CHO-K1,加G418筛选即可。
6、由于我要用CHO细胞生产基因工程抗体，用什么培养基能够很好的使之良好的生长?
【参考回答】
细胞的无血清驯化过程是，CHO细胞先在含10%血清的常规培养基里培养，再到含5%血清的培养基里培养，再到含2.5%血清的培养基里培养，依此类推，培养基里的血清不断下降，直到一个能让CHO细胞良好生长的最低血清浓度。一步到位法就是省去中间的步骤，直接由起点的血清浓度到终点浓度。
7、要转染钾通道pcDNA3.1入细胞，是选CHO细胞呢还是hek293细胞?CHO细胞转染效率高吗?
【参考回答】
表达一个蛋白的时候，首先要确认你的蛋白确实表达了，因为有很多原因可以导致蛋白表达出问题(质粒序列有错误，质粒纯度低，表达的蛋白不稳定，转染效率太低等)。所以在做任何功能性实验之前，必须要先确认蛋白的表达，通常的实验有：
(1)采用免疫荧光法。由于需要荧光二抗，比较贵。但直观，可以确定转染效率，采用好的显微镜时，可以大致知道表达蛋白在细胞中的位置。
(2)WESTERN-BLOT。可以确认表达的蛋白分子量，以及表达的量。但不直观。
(3)构建一个N或C端带荧光蛋白的质粒。这样比较费时间，同时携带的荧光蛋(通常使用GFP)有可能干扰蛋白的正常功能。但好处是转染后可以很方便的观察转染效率，蛋白在细胞中的位置等。
当然以上方法都无法知道质粒有无发生突变，所以如果你的蛋白有表达但没有功能，首先要做一个DNA测序确认你的序列没有问题。
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