1. 向回收后的类器官中加入 5-10 倍类器官基质胶混合物体积的类器官传代消化液，吹打混匀后在 37°C 条件下孵育 3-15 min 使类器官解离(提前取所需体积的消化液在 37°C 条件下预热，通常单层结构类器官的消化时间为 0.5-3 min，多层或者体积较大的类器官消化时间为 3-15min)。

注意:在此操作过程中须仔细监测消化过程，建议每隔 3-5min 吹打并镜检一次，避免过度消化。也可实时取少量消化悬液于显微镜下观察消化情况，当观察到较多的单细胞或直径在 50μm 以下的细胞簇后，即可认为消化完成。

2. 在确认消化完成的悬液中，加入至少五倍体积的类器官基础培养基进行稀释，从而终止消化作用。

注意:时间较长的消化过程结束后可适当加入胎牛血清(IMC-101-500)至终浓度 2%-5%以保证消化后细胞的活力。

3. 将上步骤所获类器官悬液进行离心(水平离心转子，150-300g，3 min)，弃上清，再次加入基础培养基重悬类器官沉淀。

4.将上步骤所获类器官悬液进行离心(水平离心转子，150-300g，3 min)，弃上清后所获类器官可用于后续类器官培养、冻存等实验操作。