一、细胞基本属性 |
细胞名称 | AAV-293人胚肾细胞(STR鉴定正确) |
细胞别称 | AAV293;AAV-293;人胚肾细胞 |
种属来源 | 人 |
年龄性别 | 胚胎 |
组织来源 | 肾;以腺病毒5DNA进行转化 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
细胞类型 | 转化细胞系 |
注意事项 | AAV-293细胞贴壁松散,操作时请尽量轻柔;换液时需预热培养基;收货如有大块脱落的细胞团,为正常现象,请按照收货注意事项处理。 |
细胞代数 | 10代以内 |
背景简介 | AAV-293细胞源自普遍使用的293 [HEK-293]细胞株,但AAV-293细胞产生的病毒滴度更高。293 [HEK-293]细胞是剪切过的腺病毒5型DNA转染的人胚肾细胞。跟293 [HEK-293]细胞一样,AAV-293细胞反式表达腺病毒E1基因,当共转染三个AAV助质粒(一个含ITR的质粒、pAAV-RC和E1缺失助质粒)时,AAV-293细胞可以产生有感染力的腺病毒-相关病毒颗粒;因此,我们推荐使用AAV-293细胞株繁殖腺病毒相关重组病毒。 |
生物安全等级 | 2 |
细胞规格 | 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
支原体检测 | 无 |
保藏机构 | NCBI_Iran; C548 |
培养基 | DMEM+10% FBS+1% PS |
培养条件 | 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ |
冻存条件 | 无血清冻存液,液氮储存 |
STR鉴定位点 | Amelogenin:X,X;CSF1PO:7,11,12;D12S391:19,21;D13S317:12,12;D16S539:9,13;D18S51:17,18;D19S433:15,18;D21S11:28,30.2;D2S1338:19,19;D3S1358:15,17;D5S818:8,9;D6S1043:11,11;D7S820:11,11;D8S1179:12,14;FGA:23,23;Penta E:7,15;TH01:7,9.3;TPOX:11,11;vWA:16,19; |
细胞货期 | 现货,1周左右 |
发货方式 | 复苏发货(免运输费用)/ 冻存发货(需加干冰运输费用) 顺丰快递 |
供应限制 | 仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主 |
二、细胞培养操作 |
收货方式 | T25瓶 | 冻存管 |
初步平衡 | 用75%酒精擦拭细胞瓶表面,放37度培养箱内静置培养2-4h,以便稳定细胞状态 | 无须平衡,直接放入-80冰箱(不超过一周)或者液氮罐保存,建议尽早复苏 |
传代密度 | 细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养 | 第二天换液并检查细胞密度 |
传代比例 | 首次传代建议1:2传代,1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 | 一管细胞建议接种到6cm培养皿或者T25瓶 |
传代方法 | a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗AAV-293细胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有AAV-293细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(视细胞消化情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将AAV-293细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。 | 将含有1 mL AAV-293细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有AAV-293细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中,加入约4 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。 |
注意事项 | 1.运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.因运输问题,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。
| 1.收货时若发现干冰化完,检查冻存管是否融化,若已融化需直接离心细胞接种观察,若未融化可以将细胞按正常步骤保存; 2.为保证细胞的高存活率,收到产品后,请立即解冻复苏细胞。 |
到货须知 | 1.收到细胞后,及时拍照记录有无漏液、浑浊或瓶身破损现象。 2.静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照(当天以及第 2,3 天请拍照),记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。 |
备注:客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以拨打技术服务电话:400-080-3389 按 2,我们随时给予解答。 |
三、细胞冻存操作 |
冻存液配方 | 无血清冻存液,液氮储存 |
细胞密度 | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 |
冻存方法 | a、收集AAV-293细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清AAV-293细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性,若有异常,及时调整实验方案 |
四、售后服务 |
重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等,重发; 2.收到细胞未开封,如出现污染状况,重发; 3.收到细胞3天内,发现污染问题,经核实后,重发; 4.常温发货的细胞静置 2 小时后,干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后,绝大多数细胞未存活,经核实后,重发; 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后,出现污染,经核实后,重发; 6.细胞活性问题,请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果,用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,经核实后,重发; 7.视具体情况而定。 |
不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染,不重发; 2.客户严重操作失误致细胞状态不好,不重发; 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发; 4.细胞状态不好,未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片,不重发; 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的,不重发; 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的,不重发; 7.视具体情况而定。 |