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小鼠类器官系列
小鼠结肠类器官培养试剂盒
小鼠结肠类器官培养试剂盒
小鼠结肠类器官培养试剂盒

小鼠结肠类器官培养试剂盒

货号:IMV-NM19

价格:
 4492元
12802元

规格:

货期:现货

  • 产品信息

小鼠结肠类器官培养试剂盒说明书下载

产品描述

     小鼠结肠类器官培养基套装(Mouse Colonic Organoid Kit)是一款用于扩增和分化小鼠结 肠类器官的完全培养基。扩增时的小鼠结肠类器官主要由结肠干细胞和结肠祖细胞组成,分化 后的小鼠结肠类器官由结肠吸收细胞、杯状细胞和少量肠内分泌细胞组成。结肠类器官在自我 更新和分化能力、组织结构、细胞类型和功能方面,重现了体内结肠上皮的特征,因此是小鼠 结肠研究的理想体外模型。

产品信息

表 1. 试剂盒组成信息

产品货号产品名称产品规格

IMV-NM19LBM

小鼠结肠类器官基础培养基

500mL

IMV-NM19SBM

100mL

IMV-NM19L1

小鼠结肠类器官培养因子B

10mL

IMV-NM19S1

1mL

IMV-NM19L2

小鼠结肠类器官培养因子C

1mL

IMV-NM19S2

0.4mL

小鼠结肠类器官完全培养基使用说明

1. 收到类器官培养基后,将培养基置于四度冰箱进行解冻; 

2. 将解冻后培养基上下颠倒充分混匀,在无菌的生物安全柜或超净工作台中将培养基进 行分装,推荐分装成 10mL 规格; 

3.将分装后的培养基储存于-20℃,使用时拿出分装后的培养基解冻后即可使用。

注意:

分装后的类器官培养基需储存于-20℃,有效期两年,注意避免反复冻融; 

解冻后类器官完全培养基可在 4°C 储存,建议在两周内使用; 

类器官培养基中内含有细菌及真菌抗生素。

小鼠结肠类器官的建立与传代培养

原代小鼠结肠类器官的建立

1.取样:小鼠断颈处死,表面喷洒酒精杀菌。在无菌条件下取出近盲肠端 3~5cm 结肠组织, 用镊子去除肠道外部的肠系膜、脂肪,放入 4℃预冷的含双抗的 DPBS 溶液中。 

2.清洗:使用手术剪将肠管剪开,肠腔面朝上,一只手使用手术镊夹住肠组织一端,另一 只手使用手术刀片轻轻刮去肠腔表面粘液或残留的粪便,接着将结肠组织置于新的含 DPBS 的培养皿中清洗。 将清洗后的肠组织剪碎至 2-5mm 宽,随后转移至 50ml 离心管中,剧烈震 荡 30s(垂直上下震荡 90 次一上一下算一次,约 1s 三次) 弃上清,重复 3 次。 

3.消化:加入 30 mL 的 DPBS 溶液中再加入 150 μL 0.5M EDTA,至 EDTA 终浓度为 2.5mM。置 4℃摇床上,80rpm,消化 60 min。 

4.清洗:消化完成后,静置待肠段沉淀,弃上清。加入预冷 DPBS,轻柔摇匀,静置后弃 上清,重复 2 次以去除 EDTA。 

5.重悬:加入 30 mL 预冷的含 1%FBS 的 DPBS,涡旋 30s,取上清 70μm 滤网过滤,收 集穿过滤网的组织悬液,记为馏分 1。重复收集 2 次,记为馏分 2 和馏分 3。

6.收集:300g 离心力 4℃离心 3min。 

7.计数:弃上清,根据沉淀量使用 DPBS 重悬组织沉淀,取 20μL 悬液进行镜检和隐窝 计数,计数完成后吸取包含所需隐窝量的悬液,300g 离心力 4℃离心 3min,弃上清后置于冰 上。

8.用适量的基质胶重悬组织沉淀,推荐重悬密度为每 10μL 基质胶悬液包含 100 至 200 个隐窝,重悬后置于冰上,重悬时间不超过 30s 以避免基质胶过早凝固。

注意:基质胶稀释比例应在 70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

9.将基质胶和组织细胞的混合悬液点入 24 孔板底部正中央,每孔 30 μL 左右,避免悬液 接触孔板侧壁。

注意:为防止基质胶室温凝固,此步骤应尽快完成。

10.将接种完成后的培养板至于37℃二氧化碳恒温培养箱中,孵育30 min 左右待基质胶凝 固。 

11.待基质胶完全凝固后,沿壁缓慢加入已配制好的小鼠结肠类器官完全培养基,24 孔板 每孔 500μL,避免破坏已凝固结构。 

12.将24 孔板置于37℃二氧化碳培养箱中培养。 

13.每2~3 天更换一次培养基,更换培养基时应避免破坏基质胶。密切监测类器官生长状 态,理想情况下,小鼠结肠类器官应在5 至7 天内建成。

小鼠结肠类器官的传代培养

1.用经过润洗液润洗的枪头吹打刮取类器官,并将结肠类器官和培养基悬液转移至经过 润洗液润洗的 1.5 mL EP 管中。 

2.用经过润洗液润洗的枪头用力重悬类器官悬浮液,多次吹打使得类器官与基质胶分离。 

3.300×g,4℃离心 3 min,弃上清,用经过润洗液润洗的枪头加入 200 μL 类器官消 化液并充分混匀,37℃条件下消化 1- 3 min,消化结束后加入 1 mL 上皮类器官基础培养基吹 打混匀。 

4.300×g,4℃离心 3 min,弃上清,再次加入 1 mL 上皮类器官基础培养基并混匀。 

5.300×g,4℃再次离心 3min,弃上清后置于冰上。 

6.用适量的基质胶重悬类器官沉淀,重悬后置于冰上,重悬时间不超过 30 s 以避免基 质胶过早凝固。

注意:基质胶稀释比例应在 70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

7.将基质胶和类器官的混合悬液点入 24 孔板底部正中央,避免悬液接触孔板侧壁,每 孔 30 μL 左右。

注意:为防止基质胶室温凝固,此步骤应尽快完成。

8.将接种完成后的培养板至于 37℃二氧化碳恒温培养箱中,孵育 30 min 左右待基质胶 凝固后取出。 

9.待基质胶完全凝固后,沿孔壁加入提前预热的小鼠结肠类器官完全培养基,24 孔板每 孔 500 μL。 

10.将 24 孔板置于 37℃二氧化碳培养箱中培养,直到类器官需要进一步的实验。

细胞培养操作视频

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