SPTLC2 knockout THP-1 cell line

补充内容

SPTLC2（Sphingomyelin Synthase 2）是一种酶，它参与鞘磷脂（sphingomyelin）的合成，鞘磷脂是细胞膜中的一种重要脂质成分。SPTLC2编码的酶在合成鞘磷脂的过程中起着关键作用，这一过程对于细胞膜的稳定性和功能至关重要。 SPTLC2基因的突变可能导致鞘磷脂合成途径的异常，从而影响细胞膜的结构和功能。这种异常可能与某些遗传性疾病有关，例如脂质代谢紊乱或神经系统疾病。

1. 目标基因识别：首先，需要确定要敲除的SPTLC2基因的具体序列。 

2.设计sgRNA：根据SPTLC2基因的序列，设计特定的单链引导RNA（single-guide RNA, sgRNA），sgRNA的设计要确保能够特异性地识别和结合到目标基因上。 

3.构建CRISPR/Cas9系统：将sgRNA与Cas9蛋白以及必要的辅助组件（如PAM序列）结合，构建成CRISPR/Cas9系统。这个系统将用于在细胞中实现基因敲除。 

4.细胞转染：将构建好的CRISPR/Cas9系统通过转染方法引入目标细胞系中。常用的转染方法包括脂质体介导的转染、电穿孔、病毒载体介导的转染等。 

5.筛选和验证：通过特定的筛选方法，如流式细胞术或PCR分析，来筛选出成功敲除SPTLC2基因的细胞。验证敲除效果是否达到预期。 

6.单克隆细胞系的建立：从筛选出的细胞中分离出单克隆细胞，这些细胞系将具有稳定的SPTLC2基因敲除状态。 

7.基因敲除效率的评估：通过各种分子生物学方法评估敲除效率，如定量PCR、Western blot等，确保基因敲除达到了预期的效果。 

8.功能分析：对敲除SPTLC2基因的细胞系进行功能分析，评估基因敲除对细胞生长、分化、代谢等方面的影响。 

9. 冻存和维持：将构建好的SPTLC2基因敲除细胞系进行冻存，以备后续的研究使用，并确保细胞系的稳定性和纯度。

Species

Gene ID

GenBank Accession

Transcript

Human (Homo sapiens)

SPTLC2

NM_004863.4

NP_004854.1