NLRP1 knockout THP-1 cell line

补充内容

NLRP1（含NLR家族PYRIN域蛋白1）是NLR（核苷酸结合和寡聚化结构域）家族的一员，这个家族的蛋白质含有NLR结构域，可以识别病原体相关的分子模式（PAMPs），并触发炎症反应。NLRP1基因编码的蛋白质在免疫系统中起着重要作用，它可以通过与 other NLR家族成员和衔接蛋白ASC（凋亡小体相关蛋白）相互作用，来激活炎症小体（inflammasome）。 NLRP1炎症小体可以导致细胞死亡（pyroptosis）和炎症因子的释放，如白细胞介素（IL-1β和IL-18），从而在宿主防御中发挥作用。NLRP1基因的突变或表达改变与某些遗传性疾病和炎症性疾病有关。

1.设计敲除序列：研究人员需要设计特定的DNA序列，这些序列可以与NLRP1基因的靶位点结合，从而导致基因的敲除。这些序列通常是小向导RNA（sgRNA）的序列，它们可以与CRISPR/Cas9系统结合，引导Cas9酶切割目标基因。 

2.表达载体：将设计的sgRNA序列和Cas9基因克隆到表达载体中，这个载体将被转染到目标细胞中。表达载体通常包含启动子、终止子以及筛选标记基因，以确保敲除基因后的筛选和稳定转染。 

3.细胞转染：将构建的表达载体通过化学方法或病毒载体系统转入目标细胞中。转染后，细胞通常会被置于特定的培养条件下，以允许Cas9酶切割目标基因。 

4.基因编辑：C9酶在sgRNA的引导下识别并切割目标基因，导致DNA断裂。细胞随后会通过非同源末端连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）机制修复这些断裂。NHEJ是一种不完美的DNA修复机制，通常会导致基因敲除。 

5.筛选和验证：转染后的细胞会被筛选，以确认是否成功敲除NLRP1基因。这通常通过PCR、测序或特定的分子标记来完成。筛选出的细胞会被扩大培养，以建立稳定的敲除细胞系。 

6.功能分析：对敲除NLRP1基因的细胞进行功能分析，以评估基因敲除对细胞代谢、生长和分化的影响。这可能包括测定细胞内的炎症因子水平、细胞死亡方式以及细胞对特定刺激的反应等。 

7. 稳定细胞系的建立：经过验证的敲除细胞会继续培养，以建立稳定的细胞系，这些细胞系可以在未来的研究中使用。

Species

Gene ID

GenBank Accession

Transcript

Human (Homo sapiens)

NLRP1

NM_033004.4

NP_127497.1