NLRP3 knockout THP-1 cell line

补充内容

NLRP3（含NLR家族PYRIN域蛋白3）是一种炎性小体（inflammasome）的组成部分，它在免疫系统中对细菌和病毒的检测以及引发炎症反应中起着关键作用。NLRP3基因编码的蛋白质包含一个NLR家族的典型结构，即核苷酸结合和寡聚化结构域（Nucleotide-Binding and Oligomerization Domain），以及一个PYRIN样蛋白1（PYRIN-like 1）的结构域。 炎性小体是一种蛋白质复合体，可以被激活来触发细胞死亡（称为炎症性细胞死亡或pyroptosis）和释放细胞因子，如白细胞介素（IL-1β和IL-18），从而促进炎症反应。NLRP3炎症小体的激活与多种疾病有关，包括炎症性肠病、神经退行性疾病、糖尿病和感染。 NLRP3基因的突变可能导致炎性小体的异常激活，从而引起过度的炎症反应，这可能是某些遗传性疾病的根本原因。因此，NLRP3基因及其编码的蛋白质是免疫研究和疾病治疗中的一个重要靶点。

1.设计敲除序列：研究人员需要设计特定的DNA序列，这些序列可以与NLRP3基因的靶位点结合，从而导致基因的敲除。这些序列通常是小向导RNA（sgRNA）的序列，它们可以与CRISPR/Cas9系统结合，引导Cas9酶切割目标基因。 

2.构建表达载体：将设计的sgRNA序列和Cas9基因克隆到表达载体中，这个载体将被转染到目标细胞中。表达载体通常包含启动子、终止子以及筛选标记基因，以确保敲除基因后的筛选和稳定转染。 

3.细胞转染：将构建的表达载体通过化学方法或病毒载体系统转入目标细胞中。转染后，细胞通常会被置于特定的培养条件下，以允许Cas9酶切割目标基因。 

4.基因编辑：Cas9酶在sgRNA的引导下识别并切割目标基因，导致DNA断裂。细胞随后会通过非同源末端连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）机制修复这些断裂。NHEJ是一种不完美的DNA修复机制，通常会导致基因敲除。 

5.筛选和验证：转染后的细胞会被筛选，以确认是否成功敲除NLRP3基因。这通常通过PCR、测序或特定的分子标记来完成。筛选出的细胞会被扩大培养，以建立稳定的敲除细胞系。 

6.功能分析：对敲除NLRP3基因的细胞进行功能分析，以评估基因敲除对细胞代谢、生长和分化的影响。这可能包括测定细胞内的炎症因子水平、细胞死亡方式以及细胞对特定刺激的反应等。 

7. 稳定细胞系的建立：经过验证的敲除细胞会继续培养，以建立稳定的细胞系，这些细胞系可以在未来的研究中使用。

Species

Gene ID

GenBank Accession

Transcript

Human (Homo sapiens)

NLRP3

NM_001243133.2

NP_001230062.1