FABP4 knockout THP-1 cell line

补充内容

FABP4（脂肪酸结合蛋白4）是一种在脂肪细胞中高度表达的蛋白质，它在细胞内负责结合和运输长链脂肪酸。FABP4基因编码的蛋白质对于脂肪细胞的功能至关重要，包括脂质代谢、脂肪细胞的分化以及能量稳态的维持。 FABP4在代谢疾病中扮演着重要角色，特别是在肥胖和2型糖尿病中。高水平的FABP4与胰岛素抵抗和心血管疾病的风险增加有关。此外，FABP4还与炎症和癌症的进展有关，因为它可以促进肿瘤的生长和转移。 在临床研究中，FABP4作为一种生物标志物，用于监测疾病进展和治疗反应。例如，FABP4水平的升高可以用于诊断肥胖、糖尿病和其他代谢性疾病。

1.设计敲除序列：研究人员需要设计特定的DNA序列，这些序列可以与FABP4基因的靶位点结合，从而导致基因的敲除。这些序列通常是小向导RNA（sgRNA）的序列，它们可以与CRISPR/Cas9系统结合，引导Cas9酶切割目标基因。 

2.构建表达载体：将设计的sgRNA序列和Cas9基因克隆到表达载体中，这个载体将被转染到目标细胞中。表达载体通常包含启动子、终止子以及筛选标记基因，以确保敲除基因后的筛选和稳定转染。 

3.细胞转染：将构建的表达载体通过化学方法或病毒载体系统转入目标细胞中。转染后，细胞通常会被置于特定的培养条件下，以允许Cas9酶切割目标基因。 

4.基因编辑：Cas9酶在sgRNA的引导下识别并切割目标基因，导致DNA断裂。细胞随后会通过非同源末端连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）机制修复这些断裂。NHEJ是一种不完美的DNA修复机制，通常会导致基因敲除。 

5.筛选和验证：转染后的细胞会被筛选，以确认是否成功敲除FABP4基因。这通常通过PCR、测序或特定的分子标记来完成。筛选出的细胞会被扩大培养，以建立稳定的敲除细胞系。 

6.功能分析：对敲除FABP4基因的细胞进行功能分析，以评估基因敲除对细胞代谢、生长和分化的影响。这可能包括测定细胞内的脂质代谢、胰岛素敏感性和细胞对特定刺激的反应等。 

7. 稳定细胞系的建立：经过验证的敲除细胞会继续培养，以建立稳定的细胞系，这些细胞系可以在未来的研究中使用。

Species

Gene ID

GenBank Accession

Transcript

Human (Homo sapiens)

FABP4

NM_001442.3

NP_001433.1