RRAGA knockout THP-1 cell line

补充内容

RRAGA（RagA）是Rag家族蛋白的一员，该家族在哺乳动物细胞的氨基酸吸收和翻译调控中起关键作用。RagA和RagB蛋白在细胞内形成异源二聚体，与RagC和RagD蛋白一起构成Rag复合体，该复合体参与将信号从细胞膜上的氨基酸传感器（例如Ragulator蛋白）传递到细胞质中的mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶蛋白）复合体。 RagA的缺失会导致氨基酸吸收和mTOR信号传导的缺陷，从而影响细胞的生长和代谢。因此，RagA在氨基酸饥饿响应、癌症发展和免疫反应中起着重要作用。 在实验室研究中，RagA通常作为氨基酸信号传递的一个标志物，用于研究氨基酸如何影响细胞生长和代谢。此外，RagA的过表达或缺失模型被用于研究其在细胞生长、凋亡和氨基酸代谢中的作用。 RagA基因敲除模型用于研究其在体内的功能。这些模型显示，RagA的缺失会导致氨基酸信号传递和mTOR信号传导的缺陷，影响细胞的生长和代谢。 在临床研究中，RagA的表达和活性可以作为诊断和监测某些疾病进展的指标。通过深入了解RagA的功能和作用，科学家们希望能够开发出新的治疗方法来治疗与氨基酸代谢和mTOR信号相关的疾病。

1.设计敲除序列：设计特定的DNA序列，这些序列可以与RagA基因的靶位点结合，从而导致基因的敲除。 

2.构建表达载体：将设计的sgRNA序列和Cas9基因克隆到表达载体中，这个载体将被转染到目标细胞中。 

3.细胞转染：将构建的表达载体通过化学方法或病毒载体系统转入目标细胞中。 

4.基因编辑：Cas9酶在sgRNA的引导下识别并切割目标基因，导致DNA断裂。 

5.筛选和验证：通过PCR、测序或特定的分子标记来确认是否成功敲除RagA基因。 

6.功能分析：对敲除RagA基因的细胞进行功能分析，以评估基因敲除对细胞代谢、生长和分化的影响。 

7. 稳定细胞系的建立：经过验证的敲除细胞会继续培养，以建立稳定的细胞系。

Species

Gene ID

GenBank Accession

Transcript

Human (Homo sapiens)

RRAGA

NM_006570.5

NP_006561.1