产品描述
本产品为hPSC诱导分化肾类器官试剂盒，人多能干细胞hPSC通过该试剂盒诱导分化可得到肾类器官，该类器官具类似肾的细胞组成，有肾小球、肾小管上皮细胞等。
本试剂盒需要操作人员具有hPSC培养经验，对类器官具有一定了解。
实验仪器、材料
仪器：生物安全柜、细胞培养箱、水平式离心机、倒置显微镜、低温冰箱
材料：6孔细胞培养板、超低吸附6孔板、离心管（规格为15 mL 和 50 mL）、移液器（规格为 10 μL、100 μL、1000 μL）、无菌吸头（规格为 10 μL、200 μL 和 1000 μL）、移液管（规格为10mL、50mL）
试剂盒内容
试剂盒使用流程
①EB形成（2天）
1.hPSC于基质胶包被的六孔板的一个孔生长至70-80%汇合度。
2.吸去培养基。
3.孔中加入1mL PBS（无钙镁离子）洗，吸去。
4.孔中加入1mL accutase，37℃消化5min。
5.取11mL EB形成培养基与22μL EB形成补充剂混匀获得EB形成完全培养基，于超低吸附6孔板的3个孔每孔加入2mL EB形成完全培养基。
6.当看到克隆发白发亮，轻轻拍打板侧（每侧拍两下），把细胞拍下来，再在生物安全柜中，加入1mL EB形成完全培养基终止消化，把这2mL体系吸入装有3mL EB形成完全培养基的15mL离心管离心160g 5min，吸弃上清至剩余几十微升，轻弹孔底3-4下，让细胞沉淀溶于上清，往孔板里加1mL EB形成完全培养基，轻弹3-4下，混匀即可，把这一毫升细胞悬液平均悬空加入提前准备的6孔板3个孔中，37℃、5%CO2过夜。
7.第二天（D-1）镜下观察可以看到形成大量、均一的EB，半数换液，补充50%EB形成培养基（不含补充剂），置于水平摇床培养。（注意：所用培养基均应提前在工作台放置30min以恢复室温，后面操作同理。）
②后原始条纹诱导（4天）
8.D0，解冻补充剂A，将基础培养基1与补充剂A混匀，作为后原始条纹诱导培养基。
9.吸出孔中EB形成培养基，注意不要将EB吸出。
10.每孔加入2mL 后原始条纹诱导培养基，放入37℃，5%CO2的培养箱继续培养。
11.D2每孔更换2mL后原始条纹诱导培养基，操作如9、10。
③中间中胚层诱导（3天）
12.D4，解冻补充剂B，将基础培养基2与补充剂B混匀，作为中间中胚层诱导培养基。每孔更换2mL中间中胚层诱导培养基，操作如9、10。
13.D6每孔更换2mL中间中胚层诱导培养基，操作如9、10。
④肾发生（5天）
14.D7，解冻补充剂C、D，将10mL基础培养基3与补充剂C混匀，作为肾发生培养基1。每孔更换2mL肾发生培养基1，操作如9、10，放入37℃，5%CO2的培养箱培养1小时。
15.1小时后，将30mL 基础培养基3与补充剂D混匀，作为肾发生培养基2。每孔更换2mL肾发生培养基2，操作如9、10。
16.D9、D11，每孔更换2mL肾发生培养基2，操作如9、10。
⑤肾类器官成熟（11天）
17.D12开始，每2天更换成熟培养基，每孔2mL，操作如9、10，至D23。
