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Advanced-diff系列
胰岛类器官

hPSC诱导分化胰岛类器官试剂盒

货号:IMV-I001

价格:
 32500元

规格:

货期:现货

  • 产品信息

hPSC诱导分化胰岛类器官试剂盒说明书下载

产品描述

本产品为PSC诱导分化胰岛类器官试剂盒,人多能干细胞hPSC通过该试剂盒诱导分化可得到胰岛类器官,该类器官具类似胰岛的细胞组成,有成熟的α、β细胞。

本试剂盒需要操作人员具有hPSC培养经验,对类器官具有一定了解。

实验仪器、材料

仪器:生物安全柜、细胞培养箱、水平摇床、倒置显微镜、低温冰箱

材料:6孔细胞培养板、超低吸附6孔板、离心管(规格为15 mL 和 50 mL)、移液器(规格为 10 μL、100 μL、1000 μL)、无菌吸头(规格为 10 μL、200 μL 和 1000 μL)、移液管(规格为10mL、50mL)

试剂盒内容

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试剂盒使用流程

①EB形成(2天)

1.hPSC于基质胶包被的六孔板的一个孔生长至70-80%汇合度。

2.吸去培养基。

3.孔中加入1mL PBS(无钙镁离子)洗,吸去。

4.孔中加入1mL accutase,37℃消化5min。

5.取11mL EB形成培养基与22μL EB形成补充剂混匀获得EB形成完全培养基,于超低吸附6孔板的3个孔每孔加入2mL EB形成完全培养基。

6.当看到克隆发白发亮,轻轻拍打板侧(每侧拍两下),把细胞拍下来,再在生物安全柜中,加入1mL EB形成完全培养基终止消化,把这2mL体系吸入装有3mL EB形成完全培养基的15mL离心管离心160g 5min,吸弃上清至剩余几十微升,轻弹孔底3-4下,让细胞沉淀溶于上清,往孔板里加1mL EB形成完全培养基,轻弹3-4下,混匀即可,把这一毫升细胞悬液平均悬空加入提前准备的6孔板3个孔中,37℃、5%CO2过夜。

7.第二天(D-1)镜下观察可以看到形成大量、均一的EB,半数换液,补充50%EB形成培养基(不含补充剂),置于水平摇床培养。(注意:所用培养基均应提前在工作台放置30min以恢复室温,后面操作同理。)

②DE诱导(5天)

8.D0,解冻补充剂A,将基础培养基1与补充剂A混匀,作为DE诱导培养基,恢复室温。

9.吸出孔中EB形成培养基,注意不要将EB吸出。

10.每孔加入2mL DE诱导培养基,放入37℃,5%CO2的培养箱继续培养。

11.每天更换DE诱导培养基,持续5天。

③PE诱导(6天)

12.D5,解冻补充剂B,将基础培养基2与补充剂B混匀,作为PE诱导培养基。每孔每天更换2mL PE诱导培养基,操作如9、10,持续6天。

④EP诱导(5天)

13.D11,解冻补充剂C,将基础培养基3与补充剂C混匀,作为EP诱导培养基。每孔每天更换2mL EP诱导培养基,操作如9、10,持续5天。

⑤胰岛类器官成熟阶段(以20天为例)

14.D16,解冻补充剂D,将基础培养基4与补充剂D混匀,作为胰岛类器官成熟培养基。每孔每天更换2mL 成熟培养基,操作如9、10,持续20天。

细胞培养操作视频

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