产品描述
本产品为PSC诱导分化胰岛类器官试剂盒，人多能干细胞hPSC通过该试剂盒诱导分化可得到胰岛类器官，该类器官具类似胰岛的细胞组成，有成熟的α、β细胞。
本试剂盒需要操作人员具有hPSC培养经验，对类器官具有一定了解。
实验仪器、材料
仪器：生物安全柜、细胞培养箱、水平摇床、倒置显微镜、低温冰箱
材料：6孔细胞培养板、超低吸附6孔板、离心管（规格为15 mL 和 50 mL）、移液器（规格为 10 μL、100 μL、1000 μL）、无菌吸头（规格为 10 μL、200 μL 和 1000 μL）、移液管（规格为10mL、50mL）
试剂盒内容
试剂盒使用流程
①EB形成（2天）
1.hPSC于基质胶包被的六孔板的一个孔生长至70-80%汇合度。
2.吸去培养基。
3.孔中加入1mL PBS（无钙镁离子）洗，吸去。
4.孔中加入1mL accutase，37℃消化5min。
5.取11mL EB形成培养基与22μL EB形成补充剂混匀获得EB形成完全培养基，于超低吸附6孔板的3个孔每孔加入2mL EB形成完全培养基。
6.当看到克隆发白发亮，轻轻拍打板侧（每侧拍两下），把细胞拍下来，再在生物安全柜中，加入1mL EB形成完全培养基终止消化，把这2mL体系吸入装有3mL EB形成完全培养基的15mL离心管离心160g 5min，吸弃上清至剩余几十微升，轻弹孔底3-4下，让细胞沉淀溶于上清，往孔板里加1mL EB形成完全培养基，轻弹3-4下，混匀即可，把这一毫升细胞悬液平均悬空加入提前准备的6孔板3个孔中，37℃、5%CO2过夜。
7.第二天（D-1）镜下观察可以看到形成大量、均一的EB，半数换液，补充50%EB形成培养基（不含补充剂），置于水平摇床培养。（注意：所用培养基均应提前在工作台放置30min以恢复室温，后面操作同理。）
②DE诱导（5天）
8.D0，解冻补充剂A，将基础培养基1与补充剂A混匀，作为DE诱导培养基，恢复室温。
9.吸出孔中EB形成培养基，注意不要将EB吸出。
10.每孔加入2mL DE诱导培养基，放入37℃，5%CO2的培养箱继续培养。
11.每天更换DE诱导培养基，持续5天。
③PE诱导（6天）
12.D5，解冻补充剂B，将基础培养基2与补充剂B混匀，作为PE诱导培养基。每孔每天更换2mL PE诱导培养基，操作如9、10，持续6天。
④EP诱导（5天）
13.D11，解冻补充剂C，将基础培养基3与补充剂C混匀，作为EP诱导培养基。每孔每天更换2mL EP诱导培养基，操作如9、10，持续5天。
⑤胰岛类器官成熟阶段（以20天为例）
14.D16，解冻补充剂D，将基础培养基4与补充剂D混匀，作为胰岛类器官成熟培养基。每孔每天更换2mL 成熟培养基，操作如9、10，持续20天。
