hPSC来源神经干祖细胞iNSPC-H1

免疫荧光鉴定

细胞传代

a、100g离心弃去上清，加入1-2 mL Accutase(含10μM Y-27632)，置于37℃水浴消化10-15 min。

b、10-15 min后每孔加入等量 NSPC扩增培养基，轻轻吹打细胞，使细胞解离成小团块或单细胞。

c、将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心5 min。

d、仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的NSPC扩增培养基重悬细胞，轻轻地上下移液以确保细胞溶液均匀。

e、使用自动细胞计数器计数细胞，使用台盼蓝排除死亡细胞，使用NSPC扩增培养基稀释细胞，将细胞以5×105/mL(或1:2-1:3比例)接种到低吸附六孔板中。

a、收集细胞及细胞培养液，装入离心管中，100g离心5 min，弃上清液，加入2 mL Accutase(含10μM Y-27632)水浴消化15 min，。

b、根据细胞数量加入神经细胞无血清冻存液，使细胞密度1×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h。

4. 客户可购买逸漠生物NSPC扩增培养基(含NSPC扩增基础培养基，货号IMI-SP01BM2;NSPC扩增培养基补充剂，货号IMI-SP01C)。

5. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

6.该细胞仅供科研使用。

7. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。

8. 注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者1个六孔板(或按照底面积换算)，必须使用低吸附培养器皿，或经过特殊液体润洗使得细胞难以贴于培养器皿表面。

2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发;

3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发;

4.常温发货的细胞静置 2 小时后，干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发;

5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，出现污染，经核实后，重发;

6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发;

7.视具体情况而定。

2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发;

3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发;

4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发;

5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发;

6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发;

7.视具体情况而定。