APAF1 knockout HeLa cell line

补充内容

APAF1（凋亡蛋白激活因子-1）是一种人类蛋白，与线虫CED-4基因同源。它在细胞色素C和dATP存在的情况下被发现是卡酶-3的激活因子。APAF1在凋亡途径中扮演关键角色，形成大复合物——凋亡体，进而招募和激活线粒体途径中的启动卡酶-9。研究发现，APAF1的沉默可以降低膀胱癌细胞对顺铂化疗的敏感性。此外，环状RNA Cdr1as可以直接结合miR-1270，消除其对APAF1的作用。EV71通过3C蛋白- hnRNPA1-APAF1-卡酶-3-凋亡轴的机制释放病毒。APAF1在多种疾病中发挥作用，如肺癌和过渡性细胞癌。进一步的分析发现APAF1的功能与其在凋亡和生存FAS信号级联中的作用有关。 研究表明，APAF1在细胞死亡的内在或线粒体途径中起着关键作用，通过在胞色素c释放后寡聚化并形成凋亡体的大复合物来调节这一过程。凋亡体可以招募和激活线粒体途径的启动卡酶-9，从而引发细胞凋亡。APAF1的沉黙可降低膀胱癌细胞对顺铂化疗的敏感性，这表明APAF1在调节肿瘤细胞对化疗药物的反应中起着重要作用。此外，环状RNA Cdr1as介导的miR-1270对APAF1的影响也揭示了一种新的细胞死亡调控机制。在EV71病毒释放过程中，APAF1与其他蛋白质的相互作用形成复杂的调控网络，影响病毒复制和放出。APAF1还与多种疾病的发生和发展相关，如肺癌和过渡性细胞癌，提示其可能是一种潜在的治疗靶点。

1.设计小干扰RNA（siRNA）或锤子核酸（shRNA）针对APAF1基因的敲除：通过生物信息学工具设计针对APAF1基因的siRNA或shRNA序列，以达到特异性敲除APAF1的目的。 

2.转染siRNA或shRNA至目标细胞系：将设计好的siRNA或shRNA转染至目标细胞系中，使其介导对APAF1基因的敲除作用。 

3.筛选和确认敲除细胞系：使用特定的筛选方法（如荧光显微镜观察、PCR、Western blot等）确认敲除细胞系中APAF1基因的敲除效果。 

4.鉴定APAF1敲除细胞系的功能变化：分析敲除细胞系的凋亡信号通路、增殖能力、细胞周期、细胞凋亡等功能的变化，以验证APAF1在这些细胞过程中的作用。 

5. 进一步研究APAF1敲除细胞系的机制：深入研究APAF1基因敲除对细胞生物学特性的影响，探究APAF1在细胞凋亡途径中的作用机制，并进一步探索其在疾病发生发展中的潜在作用。

Species

Gene ID

GenBank Accession

Transcript

Human (Homo sapiens)

APAF1

NM_181861.2

NP_863651.1