GSDME knockout HeLa cell line

补充内容

气孔素E（GSDME）是一种能够将非炎症性细胞凋亡转化为焦亡的孔形成蛋白的前体。GSDME的中文名称为气孔素E。该蛋白构成了成孔蛋白的前体，在裂解后释放的N端部分移动到质膜，与膜结合形成内径为10-15纳米的孔，从而引发细胞焦亡的生理功能。 研究揭示了GSDME的全新生理功能及其内源激活机制，阐明了细胞焦亡在肿瘤免疫中的重要作用，为肿瘤治疗提供了新的思路。研究发现，Gasdermin E通过控制中性粒细胞的死亡方式来影响炎症反应的发生。在中性粒细胞中，GSDME的功能是通过蛋白酶3和caspase-3介导的严格调节的裂解和激活，在老化中性粒细胞中导致焰症的发生。GSDME的缺陷并不会改变中性粒细胞的整体状态。 另外，研究还表明GSDME可被caspase-3特异性切割并激活，从而导致焦亡的发生。这一发现改变了人们对程序性细胞死亡的理解。此外，一些研究指出，在阿尔茨海默病中，GSDME在细胞焦亡中的介入可能对病情有着重要作用。

1. 设计携带敲除基因的质粒载体，通常包括带有靶向GSDME基因的gRNA序列和Cas9蛋白的表达序列。 

2. 使用目标细胞系（通常是人类细胞系）进行细胞培养，确保细胞状态良好。 

3.利用适当的转染方法（例如化学转染、电穿孔法、病毒载体转染等），将设计好的敲除载体转染到目标细胞中。 

4. 使用适当的筛选方法（例如利用抗生素抗性基因）筛选出成功敲除了GSDME基因的细胞。 

5. 对筛选得到的细胞进行PCR、Western blot等实验验证GSDME基因是否被成功敲除。 

6. 进行功能实验，比如观察敲除细胞的凋亡、焦亡等特性，验证GSDME的敲除对细胞生物学过程的影响。 

7. 将已验证的敲除细胞系扩增并保存，以备进一步的研究或实验使用。

Species

Gene ID

GenBank Accession

Transcript

Human (Homo sapiens)

GSDME

NM_004403.3

NP_004394.1