Caspase 1 knockout THP-1 cell line

补充内容

Caspase 1是一种特定的酶，属于半胱氨酸蛋白酶（caspase）家族，它在细胞凋亡（apoptosis）和炎症反应中扮演关键角色。Caspase 1的基因在人类中被称为CASP1，在鼠类中被称为Casp1。 细胞凋亡是一种程序性的细胞死亡过程，对于维持多细胞生物的内环境稳定和组织重塑至关重要。Caspase 1是凋亡过程中的一个早期启动者，它可以通过自身活化或者被其他Caspase酶激活，进而激活下游的Caspase酶，导致细胞结构的破坏和最终死亡。 此外，Caspase 1还参与炎症反应，它能够切割并激活炎症因子前体（如白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α），从而释放这些炎症介质，引发免疫反应。

1.目标基因的确定：首先确定要敲除的Caspase 1基因（CASP1），并识别其在大肠杆菌中的编码序列。 

2.设计sgRNA：设计小向导RNA（small guide RNA, sgRNA），它能够特异性地识别并绑定到Caspase 1基因的特定序列上。sgRNA的设计至关重要，因为它将决定基因敲除的效率和特异性。 

3.构建CRISPR/Cas9系统：将sgRNA与Cas9蛋白以及适当的表达载体结合，构建CRISPR/Cas9系统。这个系统将用于在细胞中实现基因敲除。 

4.将CRISPR/Cas9系统引入细胞：通过转染、电穿孔、脂质体介导的转染等方法将CRISPR/Cas9系统引入目标细胞中。 

5.筛选和验证敲除细胞：通过PCR、测序等方法筛选出成功敲除Caspase 1基因的细胞。此外，可以通过功能实验（如细胞凋亡实验、炎症因子检测等）来验证敲除效果。 

6.扩大培养和冻存：一旦筛选出敲除细胞，就需要将它们扩大培养以便进行后续的实验研究。同时，为了长期使用，还需要将细胞冻存起来。 

7. 功能研究：在基因敲除细胞系中进行一系列的功能性实验，以研究Caspase 1基因敲除对细胞生物学功能的影响。

Species

Gene ID

GenBank Accession

Transcript

Human (Homo sapiens)

CASP1

NP_150634

NP_150634.1