| 细胞基本属性 | |||||
| 产品名称 | Citrate Synthetase knockout THP-1 cell line | ||||
| 产品货号 | IMKO-H043 | ||||
| 产品规格 | 1×106cells/T25或1mL冻存管 | ||||
| 储存及运输 | 干冰运输;储存在液氮中 | ||||
| 产品分类 | THP-1细胞 | ||||
| 物种 | 人 | ||||
| 修饰基因 | Citrate Synthetase | ||||
| 修饰类型 | 基因敲除 | ||||
| 转导方法 | CRISPR/Cas9 | ||||
| 克隆类型 | 纯化克隆 | ||||
| 细胞鉴定 | 通过遗传学方法确认Citrate Synthetase基因敲除 | ||||
| 细胞形态 | 上皮细胞样 | ||||
| 生长特性 | 贴壁生长 | ||||
| 培养体系 | 90%MEM+10% FBS+1%PS | ||||
| 传代比例 | 1：2至1：3 | ||||
| 传代周期 | 每周3次 | ||||
| 培养条件 | 气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃ | ||||
| 冻存条件 | 无血清冻存液，液氮储存 | ||||
|
补充内容 |
柠檬酸合酶（Citrate Synthase，简称CS）是一种在生物体内广泛存在的酶，它催化柠檬酸循环（也称为三羧酸循环或克雷布斯循环）的起始步骤。柠檬酸循环是细胞内的一种关键代谢途径，用于将乙酰辅酶A转化为二氧化碳和水，同时释放出大量的化学能，这些能量可以被细胞用于各种生物合成过程和维持细胞功能。 | ||||
| 构建方法 |
|
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| Citrate Synthetase基因敲除细胞系构建通常涉及的步骤 |
1. 设计敲除序列：研究人员需要设计特定的DNA序列，这些序列可以与CS基因的靶位点结合，从而导致基因的敲除。这些序列通常是小向导RNA（sgRNA）的序列，它们可以与CRISPR/Cas9系统结合，引导Cas9酶切割目标基因。 2.构建表达载体：将设计的sgRNA序列和Cas9基因克隆到表达载体中，这个载体将被转染到目标细胞中。表达载体通常包含启动子、终止子以及筛选标记基因，以确保敲除基因后的筛选和稳定转染。 3.细胞转染：将构建的表达载体通过化学方法或病毒载体系统转入目标细胞中。转染后，细胞通常会被置于特定的培养条件下，以允许Cas9酶切割目标基因。 4.基因编辑：Cas9酶在sgRNA的引导下识别并切割目标基因，导致DNA断裂。细胞随后会通过非同源末端连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）机制修复这些断裂。NHEJ是一种不完美的DNA修复机制，通常会导致基因敲除。 5.筛选和验证：转染后的细胞会被筛选，以确认是否成功敲除CS基因。这通常通过PCR、测序或特定的分子标记来完成。筛选出的细胞会被扩大培养，以建立稳定的敲除细胞系。 6.功能分析：对敲除CS基因的细胞进行功能分析，以评估基因敲除对细胞代谢、生长和分化的影响。这可能包括测定细胞内的柠檬酸水平、酶活性、能量代谢和细胞增殖能力等。 7. 稳定细胞系的建立：经过验证的敲除细胞会继续培养，以建立稳定的细胞系，这些细胞系可以在未来的研究中使用。 |
||||
| Citrate Synthetase基因的基本信息 |
Species |
Gene Symbol |
Gene ID |
GenBank Accession |
Transcript |
|
Human (Homo sapiens) |
ACLY |
47 |
NP_001290203 XP_005257450 |
NP_001290203.1 |
|
| 关于基因 | Official Symbol | ACLY | |||
| Previous Symbol | ACLY | ||||
| Official Full Name | ATP citrate lyase | ||||
| Synonyms | Eukaryota; Metazoa; Chordata; Craniata; Vertebrata; Euteleostomi; Mammalia; Eutheria; Euarchontoglires; Primates; Haplorrhini; Catarrhini; Hominidae; Homo | ||||
| Location | 1p34.1 | ||||
| Gene Type | Protein-coding | ||||
| Uniprot ID | Q4LE36 | ||||
| Pathway/Library | TCA cycle, metabolism | ||||
| Gene Summary | ATP citrate lyase is the primary enzyme responsible for the synthesis of cytosolic acetyl-CoA in many tissues. The enzyme is a tetramer (relative molecular weight approximately 440,000) of apparently identical subunits. It catalyzes the formation of acetyl-CoA and oxaloacetate from citrate and CoA with a concomitant hydrolysis of ATP to ADP and phosphate. The product, acetyl-CoA, serves several important biosynthetic pathways, including lipogenesis and cholesterogenesis. In nervous tissue, ATP citrate-lyase may be involved in the biosynthesis of acetylcholine. Multiple transcript variants encoding distinct isoforms have been identified for this gene. [provided by RefSeq, Dec 2014] | ||||
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