产品简介
Steminduce系列拟胚体分化试剂盒是逸漠生物研发，能够支持人类胚胎干细胞（human embryonic stem cell, hESC）以及人类诱导多能干细胞（human induced pluripotent stem cell, hiPSC）生成拟胚体（embryoid body，EB），并保证在后续培养过程的存活，为后续分化实验提供支持。
该试剂盒不含血清成分，经过H1、H9、iPSC细胞多次验证，能够稳定、大量形成拟胚体。
产品信息
内毒素含量≤25 EU/mg
储存条件
冰袋运输，收到后基础培养基与补充剂分装保存在-20℃,保存6个月；2~8℃解冻，保存2周，禁止反复冻融。
使用说明
以六孔板为例
1、基础培养基、补充剂提前解冻，实验前基础培养基、accutase消化液复温到室温。
2、当iPSC/hESC生长至70-80%汇合度，镜下观察细胞状态良好。
3、吸弃培养基。
4、每孔加入1mL accutase消化液，于37℃培养箱中消化5min。
5、.取11mL EB形成培养基与22μL EB形成补充剂混匀获得EB形成完全培养基，于超低吸附6孔板的3个孔每孔加入2mL EB形成完全培养基。
6、当看到克隆发白发亮，轻轻拍打板侧（每侧拍两下），把细胞拍下来，再在生物安全柜中，加入1mL EB形成完全培养基终止消化，把这2mL体系吸入装有3mL EB形成完全培养基的15mL离心管离心160g 5min，吸弃上清至剩余几十微升，轻弹孔底3-4下，让细胞沉淀溶于上清，往孔板里加1mL EB形成完全培养基，轻弹3-4下，混匀即可，把这一毫升细胞悬液平均悬空加入提前准备的6孔板3个孔中，37℃、5%CO2过夜。
7、第二天镜下观察可以看到形成大量、均一的EB，半数换液，补充50%EB形成培养基（不含补充剂），置于水平摇床培养。
8、每天更换基础培养基，或进行后续分化实验。
注意事项
1、iPSC/hESC形成拟胚体最佳密度大约为1.5*105细胞/mL，对于六孔板，当一孔细胞生长至70-80%汇合度时，可用于六孔板3个孔的拟胚体形成。
2、形成拟胚体iPSC/hESC细胞保持未分化的状态，请在实验前确定细胞状态良好。
3、第二天可以看到大量拟胚体形成，不过个体较小，不建议直接进行分化等实验，推荐第三天进行实验。
示图
H1 形成拟胚体第二天（A）,第三天（B），40X。
